[發明專利]觀察木質部薄壁組織的切片混合染色液和切片的制備方法

在審

• 申請號: 201811050000.7
• 申請日: 2018-09-10
• 公開（公告）號: CN109187127A
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發明（設計）人: 陳志成;李姍;萬賢崇
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院林業新技術研究所;中國林業科學研究院木材工業研究所
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 王芊雨;俞佳

本發明公開了一種觀察木質部薄壁組織的切片混合染色液和切片的制備方法。該切片混合染色液包括：番紅乙醇溶液和阿爾辛藍水溶液；其中，番紅乙醇溶液和阿爾辛藍水溶液的體積比是30～40:60～70。其中，所述番紅乙醇溶液和阿爾辛藍水溶液的濃度均是0.008～0.012g/ml。該切片混合染色液中番紅染色纖維組織，阿爾辛藍染色薄壁組織，可以同時清晰地觀察到染色后的切片的薄壁組織、纖維組織和導管(或管胞)，能夠明顯區分木質部纖維組織和薄壁組織，相比其他番紅乙醇溶液和阿爾辛藍水溶液體積比的染色液的染色效果更好，且切片制備時間短，適用于所有木本植物，克服了傳統切片方法中染色劑難以通過顏色區分這兩種組織的缺點。

技術領域

本發明是關于一種生物切片制備的技術領域，特別是涉及一種觀察木質部薄壁組織的切片混合染色液和切片的制備方法。

背景技術

制作木質部切片是植物解剖學研究的常用手段。木本植物的木質部主要由導管(或管胞)、纖維組織和薄壁組織組成。薄壁組織是木質部中的活細胞，具有存儲、傳遞水和營養物質的功能，為了加強對植物種間功能、策略差異的研究，現在迫切需要對木本植物薄壁組織的性狀進行研究。

但是目前常用的制作木質部切片的染色劑對薄壁組織和纖維組織的著色都是純色，或者二者的顏色區分不明顯，所以難以通過顏色區分薄壁組織和纖維組織。比如常用的染色劑有間苯三酚(phloroglucinol)、龍膽紫(gentian violet)、甲苯胺藍(toluidineblue)及包含番紅(safranin)和快綠(fast green)的混合液都無法非常顯著、直觀地區分開纖維組織和薄壁組織。

制備石蠟切片、樹脂切片的方法都需要加入包埋劑，加入包埋劑的切片方法往往需要透明、包埋、切片、脫蠟(脫包埋劑)、染色、封片等流程，制備過程較為復雜，往往一批樣品做下來需要花費幾天的時間，耗時很長。此外，包埋劑浸入植物組織也會破壞薄壁組織這種活細胞的活性，進一步難以區分薄壁組織和纖維組織。

番紅，也稱作番紅O、基本紅2或藏紅T，是用在組織學和細胞學的生物染色劑。阿爾辛藍，英文名稱：Alcian Blue，CAS：12040-44-7：分子式：C₅₆H₆₈Cl₄CuN₁₆S₄，中文別名：阿爾新蘭、阿爾新藍，具有如下結構式：

發明內容

本發明的目的在于提供一種觀察木質部薄壁組織的切片混合染色液，其能夠解決現有木質部切片制作方法復雜、耗時時間長且薄壁組織和纖維組織不易區分的問題。

為實現上述目的，本發明提供了一種觀察木質部薄壁組織的切片混合染色液，包括：番紅乙醇溶液和阿爾辛藍水溶液；其中，番紅乙醇溶液和阿爾辛藍水溶液的體積比是30～40:60～70。

在一優選的實施方式中，所述番紅乙醇溶液的濃度是0.008～0.012g/ml，阿爾辛藍水溶液的濃度是0.008～0.012g/ml；優選的，所述番紅乙醇溶液的濃度是0.009～0.011g/ml，阿爾辛藍水溶液的濃度是0.009～0.011g/ml；最優選的，所述番紅乙醇溶液的濃度是0.010g/ml，阿爾辛藍水溶液的濃度是0.010g/ml。

在一優選的實施方式中，所述番紅乙醇溶液的溶劑是體積百分比濃度為40％～60％的乙醇溶液；優選的，所述乙醇溶液的體積百分比濃度為50％。

采用該濃度乙醇溶液可使番紅溶解效果好，溶解速度快，溶解徹底且無殘渣。

在一優選的實施方式中，所述阿爾辛藍水溶液的溶劑選自純凈水、去離子水或蒸餾水中任意一種。

在一優選的實施方式中，所述番紅乙醇溶液和阿爾辛藍水溶液的體積比是32～37:62～67；優選的，所述番紅乙醇溶液和阿爾辛藍水溶液的體積比是35:65。