[發明專利]飼料中兩種二氫查耳酮含量的同時分離檢測方法

有效

• 申請號: 201811046999.8
• 申請日: 2018-09-08
• 公開（公告）號: CN109061023B
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 潘城;江鳳玲;吳凌;李晨熙;胡朝陽;謝勇
• 申請（專利權）人: 福建省產品質量檢驗研究院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 康永輝

1.飼料中兩種二氫查耳酮含量的同時分離檢測方法，其特征在于, 所述的兩種二氫查耳酮為新橙皮苷二氫查耳酮和柚皮苷二氫查耳酮；所述的檢測方法包括：

（1）制備混合標準儲備液和混合標準工作液，所述混合標準儲備液均為980 mg/L的混標儲備液，混合標準工作液為將二氫查耳酮的標準儲備液采用逐級稀釋法用50%甲醇溶液配制濃度為0.196 mg/L、0.490 mg/L、0.980 mg/L、4.90 mg/L、9.80 mg/L、49.0 mg/L的系列標準工作溶液；

（2）制備待測樣品溶液：飼料樣品加入70 mL甲醇溶液，置于超聲波振蕩器中超聲萃取30 min，轉移至100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度線并混勻;提取液于10000 r/min下離心3 min，取上清液10 mL于50 mL雞心瓶中，旋轉蒸發儀上于40 ℃下旋至近干，用2 mL 50%甲醇溶液分兩次渦旋溶解后轉移至50 mL離心管中，加入8 mL純水，于10000 r/min下離心3min，過HLB固相萃取小柱凈化;凈化液氮吹至0.5 mL，加入50%甲醇溶液定容至1.0 mL，混勻，以尼龍66有機濾膜過濾，濾液供分析用;

（3）所用儀器為高效液相色譜儀，檢測器為光電二極管陣列檢測器,色譜柱為反相C18柱，柱溫為35±1 ℃，檢測波長282nm;流動相A為甲醇，流動相B為純水；洗脫梯度程序:0 ～15.0 min，43% A；15.0 ～ 15.5 min，43% ～ 90% A；15.5 ～ 20.0 min，90% A；20.0 ～20.5 min，90% ～ 43% A；20.5 ～ 25.0 min，43% A;流速1.0 mL / min；進樣量25 μL;

（4）標準曲線的繪制：將兩種二氫查耳酮類甜味劑的系列混合標準工作溶液注入高效液相色譜儀中，在步驟（3）的色譜條件下進行梯度洗脫和檢測，以保留時間定性，根據各濃度所測峰面積的大小與其濃度的對應關系繪制標準曲線;

（5）結果分析：取（2）中濾液注入高效液相色譜儀中，在步驟（3）的色譜條件下進行梯度洗脫和檢測，測得濾液中各目標物的峰面積，以保留時間定性，根據（4）中制作的標準曲線定量，計算出待測樣品中新橙皮苷二氫查耳酮和柚皮苷二氫查耳酮的含量。

2.根據權利要求1所述飼料中兩種二氫查耳酮含量的同時分離檢測方法，其特征在于，步驟（1）中所述混合標準儲備液的配制具體步驟為：準確稱取新橙皮苷二氫查耳酮和柚皮苷二氫查耳酮標準品各0.1000g，用甲醇溶液溶解并定容至100 mL，配制得濃度均為980mg/L的標準儲備液；步驟（1）中所述混合標準工作溶液的配制具體步驟為：將新橙皮苷二氫查耳酮和柚皮苷二氫查耳酮的標準儲備液采用逐級稀釋法用50%甲醇溶液配制濃度為0.196 mg/L、0.490 mg/L、0.980 mg/L、4.90 mg/L、9.80 mg/L、49.0 mg/L的系列標準工作溶液;所有標準儲備液和標準工作溶液置于冰箱中于0 ℃ ~ 4 ℃溫度下保存。

3.根據權利要求1所述飼料中兩種二氫查耳酮含量的同時分離檢測方法，其特征在于，步驟（2）中所述待測樣品溶液的制備具體步驟為：

稱取飼料樣品10 g,精確至0.01 g, 置于100 mL具塞錐形瓶中，加入70 mL甲醇溶液，置于超聲波振蕩器中超聲萃取30 min，轉移至100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度線并混勻;提取液于10000 r/min下離心3 min，取上清液10 mL于50 mL雞心瓶中，旋轉蒸發儀上于40 ℃下旋至近干，用2 mL 50%甲醇溶液分兩次渦旋溶解后轉移至50 mL離心管中，加入8mL純水，于10000 r/min下離心3 min，待凈化;先后用3 mL甲醇和3 mL純水淋洗HLB小柱，將上述溶液轉移至HLB小柱，保持流出液流速1~2 d/min，待上柱液全部流出后，5 mL 10%甲醇溶液淋洗，5 mL 60%甲醇溶液洗脫，洗脫氮吹至0.5 mL，加入50%甲醇溶液定容至1.0 mL，混勻，以尼龍66有機濾膜過濾，濾液供分析用。

4.根據權利要求1所述飼料中兩種二氫查耳酮含量的同時分離檢測方法，其特征在于，步驟（3）中所述反相C18色譜柱規格為150 mm×4.6 mm內徑，顆粒粒徑5 μm。