[發明專利]一種鐵皮石斛組織培養快速繁殖的方法

在審

• 申請號: 201811043248.0
• 申請日: 2018-09-07
• 公開（公告）號: CN109042329A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 王潔華;毛虹禹;宋秋芳;楊少輝
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 天津一同創新知識產權代理事務所(普通合伙) 12231
• 代理人: 陸藝

本發明公開了一種鐵皮石斛組織培養快速繁殖的方法，步驟為：(1)將鐵皮石斛成熟蒴果浸泡在多菌靈可濕性粉劑稀釋液中，水沖洗；在超凈工作臺中，用乙醇水溶液、氯化汞水溶液浸泡，置于無菌水中并放到恒溫搖床內搖動，無菌水沖洗；(2)將鐵皮石斛蒴果內絮狀種子均勻撒到誘導培養基上，誘導出原球莖后繼續培養至幼苗；(3)將幼苗接種到生根培養基，培養，獲得健壯鐵皮石斛成苗。本發明的方法，可使鐵皮石斛組織培養過程達到零污染，避免了現有方法中對鐵皮石斛造成的資源耗費。而且本發明將原球莖誘導和幼苗培養合為一步，節省了培養基的配制原料及配置時間，生根效果更好，成苗健壯，縮短了培養周期，提高了產量及質量。

技術領域

本發明涉及一種鐵皮石斛(Dendrobium officinaLe)組培快繁的方法，屬于中草藥植物組織培養領域。

背景技術

鐵皮石斛，蘭科石斛屬，是我國最珍貴的中藥材之一，與天山雪蓮、從蓉、深山靈芝、冬蟲夏草等共被尊為“中華九大仙草”并列為之首，具有益胃生津、滋陰清熱、止咳潤肺等功效。現代藥理研究表明，石斛還具有抗腫瘤、抗衰老、增強人體免疫力和擴張血管等作用。近年來，隨著人們對鐵皮石斛藥用價值的認識日益提高，鐵皮石斛的需求量也不斷提高，傳統的野生資源已經不能滿足人們的需求量，而且鐵皮石斛對生長環境要求苛刻，自然繁殖力低，使得野生資源日漸枯竭，現已被列為國家重點保護的野生藥材品種。為了更好地保護和利用鐵皮石斛資源，越來越多的科研工作者開始關注鐵皮石斛的研發工作，其中鐵皮石斛的組織培養技術是其繁殖的一種重要手段，但是一般組織培養過程中如莖段誘導、葉片誘導等污染率較高，誘導率不高，資源消耗量大而且浪費嚴重，生長周期較長。因此，如何提高培養效率、縮短培養時間、降低資源消耗已成為促進鐵皮石解產業發展的當務之急。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術不足，提供一種用鐵皮石斛蒴果作為外植體的鐵皮石斛組織培養快速繁殖的方法。

本發明的技術方案概述如下：

一種鐵皮石斛組織培養快速繁殖的方法，包括以下步驟：

(1)將鐵皮石斛成熟蒴果浸泡在多菌靈50％可濕性粉劑的1200～1500質量倍水稀釋液中2～3小時，取出后用自來水沖洗干凈；在超凈工作臺中，用體積濃度75％的乙醇水溶液浸泡30～40s，再用質量濃度0.1％的氯化汞水溶液浸泡10～12min，取出，置于無菌水中并放到恒溫搖床內，恒溫搖床的轉速為80～100rpm，溫度為23～25℃，搖動10～20min，再用無菌水沖洗4～6次；

(2)將步驟(1)獲得鐵皮石斛蒴果放到無菌紙上，用無菌刀在鐵皮石斛一端橫切個開口，用鑷子夾住另一端將蒴果內絮狀種子均勻撒到誘導培養基上，在23～25℃，光照強度1000-2000Lux，光照時間12h/d培養，誘導出原球莖后繼續培養至幼苗長至3～5cm；

(3)將步驟(2)得到的幼苗接種到生根培養基，在23～25℃，光照強度2000-3000Lux，光照時間12h/d培養，獲得6-8cm高的健壯鐵皮石斛成苗。

誘導培養基配方為：在N6培養基中加入萘乙酸，使終濃度為0.5mg/L，加入活性炭，使終濃度為0.5g/L，加入蔗糖，使終濃度為30g/L，加入瓊脂，使終濃度為4.6g/L，pH＝5.8。

生根培養基配方為：在N6培養基中加入萘乙酸，使終濃度為1mg/L，加入活性炭，使終濃度為0.5g/L，加入蔗糖，使終濃度為25g/L，加入瓊脂，使終濃度為4.6g/L，加入香蕉，使終濃度為25g/L，pH＝5.8。

本發明的優點：

實驗證明，本發明的方法，可使鐵皮石斛組織培養過程達到零污染，解決了現有組培技術中污染問題；更重要的是避免了現有方法中使用莖段、葉片作為外植體對鐵皮石斛造成的資源耗費。而且本發明將原球莖誘導和幼苗培養合為一步，節省了培養基的配制原料及配置時間，生根效果更好，成苗健壯，且大大縮短了培養周期，提高了鐵皮石斛的產量及質量。