[發明專利]一種黃鱔彈狀病毒CrERV RT-LAMP檢測引物及應用

有效

• 申請號: 201811041561.0
• 申請日: 2018-09-07
• 公開（公告）號: CN109266785B
• 公開（公告）日: 2021-08-13
• 發明（設計）人: 劉文枝;曾令兵;范玉頂;周勇
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院長江水產研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發明屬于病毒檢測領域，具體公開了一種黃鱔彈狀病毒CrERV RT?LAMP檢測引物及應用，發明人首次從患病黃鱔幼苗中分離出了一種黃鱔彈狀病毒，該病毒為黃鱔彈狀病毒（Chinese rice?field eel rhabdovirus）CrERV，針對該病毒序列設計引物，F3：5'?TCCTCCCAGGATATACGACC?3'，B3：5'?AGACAGGGGGGTAGTGGT?3'；FIP：5'–TTCCGATCTGCTGCAAGACACT?ATGGTTTGGACCTGGAGTGA?3'，BIP：5'?AGCTGCTCCTTCTGCGGATG?TGGGGCCATCAGATTCATG?3'，可對黃鱔彈狀病毒進行檢測，該引物的特異性好，靈敏度高。

技術領域

本發明屬于病毒分子檢測技術領域，具體涉及一種黃鱔彈狀病毒CrERV RT-LAMP檢測引物及應用。

技術背景

彈狀病毒科(Rhabdoviridae)病毒是一類具有廣泛宿主的負鏈RNA病毒，其顆粒呈現子彈狀或棒狀。其中狂犬病病毒(Rabies virus)最為人熟知，能引起人或其他溫血動物的狂犬病，病死率幾乎為100％，引起了世界范圍的廣泛關注，造成社會對養殖寵物安全度的恐慌。因此，對彈狀病毒進行深入研究具有重要意義。此外，彈狀病毒還能引起家畜多種急性傳染病(如牛流行熱，ephemeral fever)，以及魚類和多種農作物的感染性疾病。國際病毒分類委員會(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)于2017年發表了最新的病毒分類第十次報告，將彈狀病毒科(Rhabdoviridae)劃分為18個屬，其中能夠感染魚類的彈狀病毒有Perhabdovirus,Sprivivirus和Novirhabdovirus三個屬。目前以上三個屬能夠感染多種養殖魚類，具有強烈的致病性，死亡率可以達到100％，給全球的海淡水養殖業造成重大的經濟損失，尤其根據《進出口活水生動物檢驗檢疫協議》，進出境的養殖魚類，例如鱸魚、鯉魚、虹鱒、鯽魚、牙鲆等養殖和種苗用魚種，均要進行彈狀病毒(IHNV、SVC V、HIRRV)疫病檢測，口岸安全意義重大，影響進出口經濟貿易。

目前對感染魚類彈狀病毒科的研究主要集中在Sprivivirus和Novirhabdovirus兩個屬，而Perhabdovirus屬作為2017年彈狀病毒科新命名的一個屬，對其研究甚少。目前該屬中包括鱖魚彈狀病毒，該病毒能夠引起鱖魚大量死亡。目前，黃鱔彈狀病毒(Chineserice-field eel rhabdovirus，CrERV)全長序列尚無公開報道，更也無有效的檢測方法。

本申請首次從染病的黃鱔中分離得到黃鱔彈狀病毒(Chinese rice-field eelrhabdovirus，CrERV)，針對鱖魚彈狀病毒和黃鱔彈狀病毒在P基因結構的區別設計特異性引物，建立RT-LAMP檢測方法不僅用于檢測和監測養殖黃鱔的健康狀況，而且通過序列比對能夠區別黃鱔彈狀病毒和鱖魚彈狀病毒，為黃鱔和鱖魚養殖及早病原檢測和監測提供保障。

發明內容

本發明的目的是提供一種黃鱔彈狀病毒CrERV RT-LAMP檢測引物，所述的引物為F3：5'-TCCTCCCAGGATATACGACC-3'，B3：5'-AGACAGGGGGGTAGTGGT-3'；FIP：5'–TTCCGATCTGCTGCAAGACACTATGGTTTGGACCTGGAGTGA-3'，BIP：5'-AGCTGCTCCTTCTGCGGATGTGGGGCCATCAGATTCATG-3'。

本發明的另一個目的在于提供一種黃鱔彈狀病毒CrERV RT-LAMP檢測引物的應用，包括利用所述的引物制備成黃鱔彈狀病毒檢測試劑盒。

為了達到上述目的，本發明采取以下技術措施：