[發明專利]一種基于金殼-上轉換納米顆粒手性五聚組裝體的制備方法

有效

• 申請號: 201811041460.3
• 申請日: 2018-09-07
• 公開（公告）號: CN109097356B
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 胥傳來;瞿愛華;匡華;徐麗廣;劉麗強;吳曉玲;朱建平;宋珊珊;胡擁明
• 申請（專利權）人: 江南大學;無錫迪騰敏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10;C09K11/85;C09K11/02
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;張仕婷

1.一種基于金殼-上轉換納米顆粒手性五聚組裝體的制備方法，其特征在于步驟如下：

（1）金納米粒子的合成：采用丹寧酸還原法合成10nm的金納米顆粒；

（2）金殼的合成：在金納米顆粒中加入檸檬酸鈉、硝酸銀和抗壞血酸溶液合成金包銀納米顆粒，再加入氯金酸溶液合成金殼納米粒子；

（3）上轉換納米粒子的準備：由北京萬德高科技發展有限公司購買；基本組成單位是NaGdF4，摻雜Yb3+，Er3+，大小為20±3nm，用濃度為10mM，pH為7.5的Tris-HCl緩沖液稀釋100倍后使用；

（4）金殼-上轉換手性五聚體的組裝：利用DNA自組裝技術合成金殼-上轉換納米顆粒手性五聚體結構；具體步驟為：

將用馬來酰亞胺修飾的UCNP稀釋100倍，然后用巰基修飾的單鏈DNA5以UCNP：DNA5的摩爾濃度比為1：5的比例混合，并在含有50mM氯化鈉的10mM Tris-HCl中孵育10h進行功能化；反應結束后，在7500rpm離心10min得到納米顆粒-DNA綴合物，并重懸于1 mL 10mM Tris-HCl中；

將制備好的金殼納米粒子分別用巰基修飾的單鏈DNA，即DNA1、DNA2、DNA3-3和DNA4，以金殼納米粒子：DNA以摩爾濃度為1：5的比例混合，并在含有50mM NaCl的10mM Tris-HCl溶液中溫育10h而進行功能化；然后將樣品在9000rpm離心10min后，吸出上清液除去溶液中未偶聯上的DNA，再將沉淀重懸于1 mL 10mM Tris-HCl中；

通過混合兩種不同DNA修飾的金殼顆粒制備金殼二聚體：每種金殼用互補的DNA序列，即DNA1和DNA2，在90℃下反應5min并緩慢冷卻至室溫；然后將樣品在5000rpm離心10min，以從溶液中除去未偶聯的單個金殼顆粒，并將沉淀重懸于1 mL 10mM Tris-HCl中；

通過將DNA3-3、DNA4修飾的金殼納米粒子加入到用DNA5修飾的UCNP中，通過DNA互補雜交制備金殼-上轉換三聚體，然后將DNA3-1與它們混合；將DNA混合物在90℃加熱5 min，然后冷卻至室溫；最后，將樣品以4500 rpm離心10min以除去未偶聯的單個顆粒，并將沉淀重懸于1mL 10mM Tris-HCl中；

將上述制備好的金殼二聚體、金殼-上轉換三聚體與DNA3-2混合反應8h組裝，然后在3500 rpm離心10min得到金殼-上轉換手性五聚體；

（5）透射電鏡表征和圓二色光譜檢測：對合成的五聚組裝體進行電鏡和圓二色光譜表征；

所述DNA1序列如SEQ ID NO.1所示，DNA2序列如SEQ ID NO.2所示， DNA3-1序列如SEQID NO.3所示，DNA3-2序列如SEQ ID NO.4所示，DNA3-3序列如SEQ ID NO.5所示，DNA4序列如SEQ ID NO.6所示，DNA5序列如SEQ ID NO.7所示。