[發明專利]一種基于器官芯片的人早期胎盤發育模型建立方法有效
| 申請號： | 201811041005.3 | 申請日： | 2018-09-07 |
| 公開（公告）號： | CN110885781B | 公開（公告）日： | 2023-02-17 |
| 發明（設計）人： | 秦建華;朱玉娟;王慧 | 申請（專利權）人： | 中國科學院大連化學物理研究所 |
| 主分類號： | C12N5/073 | 分類號： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司 21001 | 代理人： | 鄭虹 |
| 地址： | 116023 *** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 器官 芯片 早期 胎盤 發育 模型 建立 方法 | ||
1.一種基于器官芯片的人早期胎盤發育模型建立方法，其特征在于：采用了一種三維基質材料，即人工基底膜Matrigel，按照以下步驟進行：
孔板修飾與人多能干細胞接種培養
先用人工基底膜修飾6孔板并放于4°冰箱4小時-7天，之后放入37°培養箱20-50min，用細胞消化液室溫消化；用細胞刮板刮下細胞團，600r離心1-3min，細胞用含Y27632 的mTeSR1培養基重懸使細胞為小團塊后接種于已修飾好的6孔板，37°培養1-4h后將培養液更換為不含Y27632 的mTeSR1培養基培養；
細胞消化并接種于三維基質中
待hPSC細胞生長為70%-90%后用消化液室溫消化，用細胞刮板刮下細胞團，離心600r1-3min，將上清液體吸走，用含BMP4的誘導hPSC分化的培養基將matrigel稀釋到一定比例后將細胞重懸得到合適的接種密度并接種，37°培養箱放置20-40min使懸有細胞的matrigel固化，之后仍為含BMP4的誘導hPSC分化的培養基；
人早期胎盤發育模型的建立
接以上步驟（2）每天更換培養基，培養基為步驟（2）中含BMP4的誘導hPSC分化的培養基，模型建立若干天；
于步驟（1）所述人工基底膜修飾6孔板具體為：將人工基底膜稀釋500-1000倍，每孔1.5ml稀釋液，放于4°冰箱4小時-7天；
所述含Y27632 的mTeSR1培養基中，Y27632 的濃度范圍為1-100 mM；
步驟（2）所述matrigel稀釋具體為培養基：matrigel的體積比為0-3:1，細胞接種密度為1×104-1×1010 cells/ml;步驟（2）所述含BMP4的誘導hPSC分化的培養基成分為：體積濃度96%的DMED/F12、體積濃度1 %的雙抗、體積濃度1%的谷氨酰胺、體積濃度1%的非必須氨基酸（MEMNEAA）、體積濃度1 %的ITS、100 ng/ml的肝素、10 ng/ml的 BMP4，由此配置的每50ml培養基中添加1gBSA，溶解后即為含BMP4的誘導hPSC分化的培養基;
步驟（3）所述模型建立時間范圍為4-12天;
該模型用于細胞形態的表征，包括hPSC細胞向滋養層細胞分化情況、融合型滋養層細胞、侵襲型滋養層細胞細胞類型的表征，與2D條件下hPSC誘導分化的表征。
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