[發明專利]大鼠腦血漿和腦組織中維格列汀衍生物的檢測方法

在審

• 申請號: 201811040614.7
• 申請日: 2018-09-07
• 公開（公告）號: CN109115924A
• 公開（公告）日: 2019-01-01
• 發明（設計）人: 蔣心惠;杜婷婷;黃丹
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種大鼠血漿和腦組織中維格列汀衍生物的檢測方法，包括以下步驟：步驟一、標準品的配制；步驟二、除腦組織和血漿樣品中的蛋白質；步驟三、除血漿樣品中的蛋白質；步驟四、HPLC?UV測定大鼠腦組織和血漿樣品中CMD?05；步驟五、結果計算。本發明提供的大鼠腦組織和血漿中CMD?05檢測方法具有步驟簡便、準確度和靈敏度好的優點，可實現樣品中CMD?05的快速檢測。

技術領域

本發明涉及醫藥化學檢測領域，更具體地說，本發明涉及一種大大鼠體內維格列汀衍生物的檢測方法。

背景技術

二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidase IV，DPP-IV)是一類跨膜絲氨酸蛋白酶，但凡N端第二位有脯氨酸或丙氨酸的多肽都可作為該酶的底物，它能從肽鏈N端水解2個氨基酸殘基，進而使多肽失活，是體內外促進胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)和葡萄糖依賴性促胰島素分泌多肽(GIP)降解和失活的關鍵酶之一。

維格列汀是一種高選擇性的DPP-IV底物抑制劑，通過DDP-IV形成可逆的共價鍵而緊密結合，緩慢解離，解離時間達到了55min，因而可以更為強效的抑制DDP-IV的活性。DPP-IV抑制劑與DPP-IV的結合存在著幾個關鍵位點：1.酶上的疏水性S1口袋，2.酶側鏈的谷氨酸205、206，3.酶側鏈的絲氨酸630。目前大部分的DPP-IV抑制劑均是圍繞這3方面設計。吡咯烷類具有較好的化學穩定性，吡咯烷環能與DPP-Ⅳ疏水性S1口袋的結合是對底物保持親和力的關鍵。作為維格列汀(Vildagliptin)的衍生物(CMD-05)同樣具有降血糖作用，其化學結構式見圖1。在維格列汀的基礎上，其在P2位的N上被衍生化形成酰基，極性降低，脂溶性增強，更有可能通過血腦屏障。因此本文建立了一種分離測定CMD-05的高效液相色譜法。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種檢測大鼠腦組織和血漿中維格列汀衍生物(CMD-05)的方法。

為了實現根據本發明的這些目的，提供了一種大鼠腦組織和血漿中維格列汀衍生物(CMD-05)的檢測方法，包括以下步驟：

步驟一、標準品溶液的配制；

步驟二、除腦組織漿樣品中的蛋白質；

步驟三、、除血漿樣品中的蛋白質

步驟四、HPLC-UV測定大鼠腦組織和血漿樣品中CMD-05；

步驟五、結果計算。

優選的是，步驟一中對標準品溶液的配制具體方法為：

取CMD-05和內標卡馬西平各10.0mg標準品，分別用乙腈配制成濃度為1.0mg.mL^-1的儲備液，放置-20℃保存備用；

優選的是，步驟二中除腦組織中的蛋白質具體方法為：

步驟a、SD大鼠斷頭取血并離心取上清液保存于-80℃，并在冰盒上迅速分離出腦組織保存于-80℃；

步驟b、腦組織稱重并剪碎，加入內標溶液50μL(含內標2.00μg.mL^-1)，腦組織加1:2倍(m/v)體積的乙腈于玻璃勻漿器中勻漿。勻漿液于12000×g,4℃條件下離心15min。取上清液50μL直接進樣分析。

優選的是，步驟三中除血漿樣品中蛋白質的具體方法為：

取血漿100μL，加入內標溶液50μL(含內標2.00μg.mL^-1)，加入150μL乙腈,渦旋1.0min后于12000×g,4℃條件下離心15min。取上清液50μL直接進樣分析。

優選的是，步驟四中HPLC-UV測定大鼠腦組織和血漿樣品中CMD-05，測定條件如下：

檢測器：島津DAD二極管陣列檢測器；