[發明專利]鼠抗人CMTM6蛋白單克隆抗體制備及用途

在審

• 申請號: 201811040336.5
• 申請日: 2018-09-03
• 公開（公告）號: CN109251249A
• 公開（公告）日: 2019-01-22
• 發明（設計）人: 高峰;陳靜;陳蕾;顧峻鋮;王佳;高源遠;李軍;李沛祥;李雪;方潔羽
• 申請（專利權）人: 靖江市人民醫院;南京基諾米醫療科技有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;A61K39/395;A61P35/00;G01N33/577;G01N33/574
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本發明公開了一種鼠抗人CMTM6蛋白的單克隆抗體，特異性高、表現穩定且效價高，具有一定的醫學基礎研究價值。本發明還涉及上述單克隆抗體在制備用于檢測CMTM6蛋白的免疫組化檢測工具中的應用。本發明建立基于CMTM6單克隆抗體的免疫組織化學技術，用于惡性腫瘤的治療方案選擇、療效和預后，惡性腫瘤主要包括黑色素瘤、非小細胞肺癌、膀胱癌、腎癌、胃癌、結直腸癌、前列腺癌、宮頸癌、乳腺癌等。本發明為制備用于免疫治療惡性腫瘤的抗體藥物提供基礎，所用抗體藥物可為人源化后的CMTM6單抗全長或部分片段(Fab，F(ab)’2或ScFv)，或將人源化后的CMTM6單抗與PD?L1單抗聯合使用。

技術領域

本發明涉及免疫學領域，特別涉及一種鼠抗人CMTM6蛋白的單克隆抗體，以及該抗體的免疫組化與治療用途。

背景技術

趨化素樣因子超家族(Chemokine-like factor MARVEL Transmembrane Domaincontaining Super Family，CMTM)是由北京大學人類疾病基因研究中心在國際上最初發現報道的一個人類基因超家族，共有8個成員。其中CMTM6-8在3號染色體上成基因簇形式存在，它們的蛋白質產物具有序列同源性和潛在的四次跨膜結構。此前研究表明CMTM家族成員在免疫系統、男性生殖系統發揮重要作用，并參與腫瘤的發生發展。2017年下半年，兩篇獨立的研究論文相繼在《自然》(Nature)雜志上發表，共同報道CMTM6/CMTM4能夠與PD-L1特異性結合，從而增強PD-L1蛋白的穩定性，增強腫瘤細胞抑制機體免疫殺傷作用的能力。其中CMTM6起主導作用，而CMTM4為后備作用，在CMTM6不表達時起效。研究表明，CMTM6和PD-L1在細胞膜和核內體(endosome)上共定位，從而CMTM6能夠阻斷PD-L1遭受降解。與此同時，敲除CMTM6會降低PD-L1表達。分別使用敲除CMTM6基因和攜帶正常CMTM6基因的鼠黑色素瘤細胞移植小鼠，結果帶有敲除CMTM6組較正常CMTM6組存活率顯著增高，說明抑制CMTM6與PD-L1的結合具有抗腫瘤的作用，是極有前途的腫瘤免疫治療新靶標。因此，研制出一種特異性高、表現穩定的CMTM6抗體，用于檢測腫瘤表面及胞漿內CMTM6的表達，對于后續是否使用CMTM6抑制劑進行免疫治療具有重要意義。

目前，國際上針對PD-1/PD-L1免疫逃逸通路的研究和應用方興未艾，但應用PD-1/PD-L1抑制劑治療時有效率低是一個最大的瓶頸。以目前已經進入肺癌一線治療的默克公司的Keytruda為例，其有效率只有44.8％。其它類似產品的有效率相對更低。這是由于不同患者其腫瘤實施免疫逃逸的機理和途徑不同，即使同樣通過PD-1/PD-L1免疫檢查點系統，其參與和影響因素也很多。近年來國際上一直在盡全力挖掘與PD-1/PD-L1系統相關的調節因素，以此通過替代PD-1/PD-L1抑制劑或聯合使用的方式來提高對腫瘤的免疫治療作用。CMTM6就是這樣一個理想的靶點。但由于此發現僅報道半年多，國際范圍內目前還沒有可以用于臨床診斷的CMTM6抗體問世，部分用于科研的抗體因特異性、穩定性等原因尚未進入臨檢應用，因此亟待研發新的性能優異的抗CMTM6單克隆抗體，填補國內外本行業的空白。本發明成功研制出一種特異性高、表現穩定且效價高的鼠抗人CMTM6蛋白的單克隆抗體，可用于不同免疫細胞和腫瘤細胞CMTM6的表達水平研究，疾病發生、進展、預后相關的病理生理研究以及CMTM6/PD-L1系統調節機體免疫功能的機理研究，具有一定的醫學基礎研究價值。本發明采用免疫組織化學方法(IHC)檢測腫瘤細胞表面CMTM6的表達，主要包括黑色素瘤、非小細胞肺癌、膀胱癌、腎癌、胃癌、結直腸癌、前列腺癌、宮頸癌、乳腺癌，為是否使用CMTM6抑制劑進行免疫治療及腫瘤的預后判斷提供科學參考，有效改善治療效果、降低治療費用，具有重要的應用價值。另外本發明抗體目前已經通過體外實驗證實，應用該抗體可以拮抗PD-L1抑制免疫應答的作用，提升免疫應答效應因子的分泌量，增強免疫功能，在人源化轉化后，將成為理想的免疫治療藥物。

發明內容