[發(fā)明專利]一種酵母功能微球的制備方法及其在免疫分析中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811039516.1
• 申請(qǐng)日: 2018-09-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109337894B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡涌剛;項(xiàng)玉強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N13/00
• 分類號(hào): C12N13/00;C12N1/16;C12N1/06;G01N33/543;C12R1/84
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所(普通合伙) 42001
• 代理人: 張紅兵

本發(fā)明屬于生物材料制備領(lǐng)域，涉及一種酵母功能微球的制備方法及其在免疫分析中的應(yīng)用。通過(guò)處理酵母細(xì)胞，制備高分散性功能微球，將金納米顆?？焖僮越M裝在處理后的酵母表面，用于免疫分析。本發(fā)明的要點(diǎn)在于，收集適當(dāng)培養(yǎng)的酵母細(xì)胞，洗滌離心和甲醛處理后，用Decoating處理液處理，得到處理后的酵母微球，用處理后的酵母微球負(fù)載金納米顆粒。本發(fā)明制備的功能微球機(jī)械剛性結(jié)構(gòu)更加穩(wěn)定，可快速負(fù)載金納米顆粒且不易脫落，作為載體的性能更加穩(wěn)定可靠，利用處理后的酵母微球負(fù)載膠體金后制備的等離子體金微球，可以顯著提高在免疫分析中的靈敏度。本發(fā)明還公開(kāi)了制備的酵母微球在動(dòng)物免疫生物檢材中的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物材料制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種酵母功能微球的制備方法及其在免疫 分析中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

基于微球載體的流式分析技術(shù)(如液相懸浮式生物芯片)是一種以微球?yàn)榉磻?yīng)載體的新 型分析技術(shù)，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)一種到數(shù)百種甚至更多不同的生物分子如蛋白質(zhì)、多肽、核酸和藥 物等目標(biāo)分析物進(jìn)行高靈敏度定量檢測(cè)。與傳統(tǒng)的平面分析技術(shù)如固態(tài)平面陣列式芯片、酶 聯(lián)免疫(ELISA)分析技術(shù)等相比較，流式分析技術(shù)具有重復(fù)性好、反應(yīng)速度快、靈活性好、 靈敏度高、可用于非常小體積中單個(gè)目標(biāo)和多目標(biāo)分子同時(shí)分析測(cè)定、特異性高、線性范圍 寬、以及操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，在生物、醫(yī)學(xué)、環(huán)境等基礎(chǔ)和應(yīng)用研究領(lǐng)域具有巨大的應(yīng)用前景， 因而越來(lái)越受到人們的廣泛關(guān)注?？蓱腋∮谒w中微球是流式分析技術(shù)的核心元件，因?yàn)槟?標(biāo)分子的捕獲和檢測(cè)都是在微球表面實(shí)現(xiàn)的。因此，微球的價(jià)格、性能是流式分析技術(shù)推廣 應(yīng)用的關(guān)鍵之一。

目前，用于流式分析測(cè)定的微球主要通過(guò)化學(xué)合成的方式制備，如聚合物微球¹、磁性微 球²、二氧化硅微球³和光子晶體⁴等。由于流式分析方法檢測(cè)的是微球表面的熒光分子，提 高微球表面的熒光信號(hào)、減少微球表面的非特異性吸附并降低檢測(cè)噪聲是提高流式分析靈敏 度的有效途徑。近年來(lái)，將金納米顆粒組裝到微球表面形成等離子體金微球(plasmonic gold microsphere,pGM)被證明是提高流式分析檢測(cè)靈敏度的有效途徑之一。這是因?yàn)榻鸺{米顆粒 表面的等離子體效應(yīng)可以有效增強(qiáng)其表面熒光探針的熒光量子產(chǎn)率^5-8,進(jìn)而來(lái)有效提高流式 檢測(cè)方法的靈敏度。pGM的另一個(gè)優(yōu)勢(shì)是捕獲探針可以通過(guò)金-硫鍵的方式直接吸附到微球 表面以用于流式分析測(cè)定^6,7，相對(duì)于傳統(tǒng)的化學(xué)偶聯(lián)方法如戊二醛^8,9法、N-羥基琥珀酰亞 胺酯(NHS)法和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)^10-12法，這種 偶聯(lián)方式更加環(huán)境友好、快速、便于操作。但是，目前使用的化學(xué)合成法制備功能微球過(guò)程 中會(huì)不可避免地使用到一些對(duì)人體和環(huán)境有害的有機(jī)試劑。此外，采用傳統(tǒng)的攪拌和擠出等 技術(shù)較難制備出尺寸、外形、表面和光學(xué)性質(zhì)均一的功能微球^13,14。因此，發(fā)展一種環(huán)境友 好、操作簡(jiǎn)單、低成本的方法用以大量制備性能優(yōu)良、高度均一的pGM具有重要的應(yīng)用價(jià)值 和研究意義。