[發明專利]一種抑制牦牛RXFP2基因表達的shRNA、慢病毒及其構建方法和用途有效
| 申請號: | 201811038693.8 | 申請日: | 2018-09-06 |
| 公開(公告)號: | CN109136225B | 公開(公告)日: | 2020-07-17 |
| 發明(設計)人: | 吳曉云;梁春年;閻萍;郭憲;丁學智;王宏博;褚敏;裴杰;包鵬甲 | 申請(專利權)人: | 中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所 |
| 主分類號: | C12N15/113 | 分類號: | C12N15/113;C12N15/867;C12N7/01 |
| 代理公司: | 東營雙橋專利代理有限責任公司 37107 | 代理人: | 劉東亮 |
| 地址: | 730050 甘肅*** | 國省代碼: | 甘肅;62 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 抑制 牦牛 rxfp2 基因 表達 shrna 病毒 及其 構建 方法 用途 | ||
1.shRNA在用于制備抑制牦牛RXFP2基因表達的試劑中的用途,其特征在于,所述的shRNA包括一對序列如下所示的shRNA:上游序列是SEQ ID NO.7,下游序列是SEQ ID NO.8;
所述的用途中,shRNA插入于載體上,所述的載體是指hU6-MCS-CMV-ZsGreen1-PGK-Puro質粒;所述的shRNA是通過為BamH I和EcoR I酶切位點插入在質粒中;
所述的用途中還包括構建抑制牦牛RXFP2基因表達的慢病毒的步驟,包括:將上述的載體與psPAX2和pMD2.G共轉染到宿主細胞培養;所述的宿主細胞是293T;
所述的hU6-MCS-CMV-ZsGreen1-PGK-Puro質粒的結構是由依次連接的CMV啟動子、ZsGreen1基因、PGK啟動子、Puromycin抗性基因、WPRE元件、3’LTR元件、PUC復制原點、AMP抗性基因、AMP啟動子、5’LTR、Packaging signal序列、CPPT元件、hU6啟動子所構成;并且,在hU6基因和CMV啟動子有酶切位點BamH I和EcoR I。
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