[發(fā)明專利]一種分步利用離子液體的梯度極性制備微纖維膠原的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811036592.7
• 申請(qǐng)日: 2018-09-06
• 公開（公告）號(hào): CN109265537B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李國英;劉思聰;黃雨琳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/78
• 分類號(hào): C07K14/78;C07K1/02
• 代理公司: 成都拓荒者知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51254
• 代理人: 麥邁

1.一種分步利用離子液體的梯度極性制備微纖維膠原的方法，其特征在于制備步驟如下：

a.原料預(yù)處理：選擇離體的哺乳動(dòng)物真皮，并進(jìn)行脫脂、脫毛處理，作為微纖維膠原的原料；

b.離子液體備料：選擇配制至少3種質(zhì)量濃度為5%-95%的離子液體，且所配制的任一離子液體的質(zhì)量濃度與其它離子液體的質(zhì)量濃度差絕對(duì)值不小于15%，其中離子液體選擇純品極性在ET(30)=50-54kcal/mol范圍內(nèi)且熔點(diǎn)低于0℃的離子液體種類；所述離子液體選擇包括1-乙基-3-甲基咪唑二腈胺鹽溶液、1-丁基-3-甲基咪唑二腈胺鹽溶液、1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽溶液、1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽溶液和1-乙基-3-甲基咪唑三氟乙酸鹽溶液中的一種或幾種；

c.分步離子液體處理：按照離子液體極性從大到小的順序，將微纖維膠原的原料依次分步放入上述順序的離子液體中進(jìn)行離子液體處理，其中每步離子液體處理分別為將微纖維膠原的原料或上一步離子液體處理所得中間產(chǎn)物浸沒入該步所使用的離子液體中，于溫度4-15℃下攪拌作用8-16h，作用時(shí)間到達(dá)后，離心取沉淀并洗滌，作為下一步離子液體處理所使用的中間產(chǎn)物；最后一步離子液體處理為將上一步離子液體處理所得中間產(chǎn)物浸沒入最后一步所使用的離子液體中，于溫度4-15℃下攪拌作用8-16h，作用時(shí)間到達(dá)后，離心取沉淀并洗滌后備用；

d.后處理：將分步離子液體處理所得進(jìn)行包括冷凍干燥、滅菌的后處理，即得微纖維膠原。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述分步利用離子液體的梯度極性制備微纖維膠原的方法，其特征在于：所述原料預(yù)處理還包括在脫脂、脫毛處理后進(jìn)行過氧化氫處理。

3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述分步利用離子液體的梯度極性制備微纖維膠原的方法，其特征在于所述原料預(yù)處理包括以下步驟：

按重量份數(shù)計(jì)，將1000份離體的哺乳動(dòng)物真皮加入到5000-6000份異丙醇中，震蕩處理10-12h，時(shí)間到達(dá)后除去異丙醇，然后與1500-1600份水和0.2-0.3份DTM198酶混合，用弱堿調(diào)pH至9.0-9.5，攪拌處理30-40min，靜置，每靜置1小時(shí)需攪拌1-2min，總計(jì)靜置16h后過濾取固體產(chǎn)物，隨后將固體產(chǎn)物加入到3000-3500份質(zhì)量濃度為60g/L的過氧化氫中，作用4-5h。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述分步利用離子液體的梯度極性制備微纖維膠原的方法，其特征在于：所述微纖維膠原的原料在浸沒入離子液體前，是經(jīng)過清凈、以及處理為通徑不大于10mm的塊狀。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述分步利用離子液體的梯度極性制備微纖維膠原的方法，其特征在于：所述分步離子液體處理中，隨每步離子液體處理，還包括同時(shí)將每一步離子液體處理所得中間產(chǎn)物逐步處理減小體積，在進(jìn)行最后一步離子液體處理前將上一步離子液體處理所得中間產(chǎn)物處理為通徑2-3mm的塊狀。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述分步利用離子液體的梯度極性制備微纖維膠原的方法，其特征在于：所述離子液體備料為分別配制下述離子液體：質(zhì)量濃度為70%的1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽溶液，質(zhì)量濃度為50%的1-乙基-3-甲基咪唑二腈胺鹽溶液，質(zhì)量濃度為30%的1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽溶液；

所述分步離子液體處理，為將微纖維膠原的原料先浸沒入質(zhì)量濃度為70%的1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽溶液中，于溫度4-15℃下攪拌作用15-16h，作用時(shí)間到達(dá)后，離心取沉淀并洗滌；將洗滌所得浸沒入質(zhì)量濃度為50%的1-乙基-3-甲基咪唑二腈胺鹽溶液中，于溫度4-15℃下攪拌作用12-13h，作用時(shí)間到達(dá)后，離心取沉淀并洗滌；然后將洗滌所得浸沒入質(zhì)量濃度為30%的1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽溶液中，于溫度4-15℃下攪拌作用9-10h，離心取沉淀并洗滌后備用。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述分步利用離子液體的梯度極性制備微纖維膠原的方法，其特征在于：所述離心取沉淀并洗滌，還包括在洗滌過程中伴隨超聲波處理。