[發(fā)明專利]一種人肝癌標志物及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811034587.2
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN110878355A
• 公開（公告）日: 2020-03-13
• 發(fā)明（設計）人: 張莉君;沈玉麗;張虹;潘蓉蓉;李曉琴;張宏
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市第七人民醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明通過第二代高通量測序技術(shù)(RNA?seq)、臨床樣本驗證及TCGA數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)ARHGAP9基因在肝癌組織中明顯低表達，且ARHGAP9低表達的患者預后較高表達患者差。再通過體內(nèi)體外的實驗，研究了ARHGAP9基因在肝癌發(fā)生中的作用及機制，揭示了一條重要的信號轉(zhuǎn)導機制，即ARHGAP9有著抑癌基因的作用與肝癌臨床預后密切相關(guān)，且通過上調(diào)FOXJ2和其靶點基因E?cadherin參與了肝癌細胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的調(diào)控。本發(fā)明通過研究ARHGAP9基因在肝癌中的表達以及其和臨床預后的關(guān)系，為肝癌的早期診斷和預后判斷提供新的標志物，以提高肝癌患者的早期診斷率，改善患者臨床預后。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種人肝癌的生物標志物及其應用。

背景技術(shù)

肝癌是最常見的惡性腫瘤之一，有很高的發(fā)病率和死亡率，嚴重威脅人類生命健康。但肝癌的發(fā)生機制目前并不清楚，由于常缺乏典型的臨床表現(xiàn)，多數(shù)病人確診時已處于晚期，出現(xiàn)腫瘤的遠處轉(zhuǎn)移。高轉(zhuǎn)移是肝癌的一個重要生物學特性，一旦發(fā)生轉(zhuǎn)移則明顯影響預后，術(shù)后生產(chǎn)率也隨之降低，是導致病人死亡的重要原因。肝癌的治療方法目前有很多種，包括手術(shù)療法、放射療法、化學療法、中醫(yī)藥治療和生物治療等，但由于其高侵襲轉(zhuǎn)移特性，效果并不理想，尋找抑制肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的特異靶分子對控制復發(fā)轉(zhuǎn)移、降低死亡率、改善生存預后具有重要意義。

肝癌侵襲轉(zhuǎn)移過程需要多種重要分子和信號通路參與，包括Rho GTP酶蛋白等。近年發(fā)現(xiàn)Rho家族蛋白參與腫瘤的生長和增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移、細胞凋亡、腫瘤新生血管的形成等各個方面。許多腫瘤組織中Rho GTP酶活性升高。Rho GTPase酶活化蛋白(RhoGAPs)是一類功能域?qū)Ｒ唤Y(jié)合Rho家族的蛋白，目前正成為一類新的腫瘤生物標志物。近年研究發(fā)現(xiàn)，許多 RhoGAPs在不同類型的癌癥中均表達下調(diào)，如DLC-1、DLC-2、ARHGAP8等。ARHGAP是一個超家族，屬于RhoGAPs。大部分的ARHGAP包含多個功能域，如DH，PH，SH2，SH3，START， arfGAP等，ARHGAP不僅能夠催化Rho-GTP解離，還能整合多條信號通路，調(diào)控細胞增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移。ARHGAP9基因在2001年由Furukawa等分離出來，可參與多條信號通路。在小鼠成纖維細胞中，ARHGAP9通過錨定MAPK而抑制ERK和p38的激活。在乙酰膽堿引起的冠狀動脈痙攣病人中，ARHGAP9可使Rac失活，而且mRNA表達水平在造血細胞中顯著升高；ARHGAP9還能抑制細胞遷移；這些結(jié)果表明，ARHGAP9在造血細胞侵入內(nèi)皮以及引起內(nèi)皮細胞功能紊亂的炎癥中起著重要調(diào)節(jié)作用。但是，到目前為止并沒有關(guān)于ARHGAP9與癌癥發(fā)生、轉(zhuǎn)移及預后相關(guān)性研究的文獻報道。

我們前期通過第二代高通量測序技術(shù)(RNA-seq)分析了14例病理級別為III級的肝癌組織和5例正常肝組織，發(fā)現(xiàn)ARHGAP家族很多基因在肝癌中表達存在異常。通過擴大臨床樣本量驗證，發(fā)現(xiàn)ARHGAP9基因在肝癌組織中明顯低表達。對TCGA數(shù)據(jù)庫中肝癌數(shù)據(jù)的表達差異進行分析發(fā)現(xiàn)，肝癌組織中ARHGAP9的表達量明顯比正常組織低，與我們的測序結(jié)果一致。參照麻省理工學院和哈佛大學broad institute研究團隊開發(fā)的針對全基因組表達譜芯片數(shù)據(jù)進行分析的工具基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis，GSEA)方法發(fā)現(xiàn)，ARHGAP9 在肝癌組織樣本中高表達會抑制CTNNB1 targets down、PPAR signalingpathway、Cell cycle等相關(guān)信號通路，這些通路與肝癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。進一步進行預后數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)， ARHGAP9低表達的患者預后較ARHGAP9高表達患者差。但是，ARHGAP9是否能夠調(diào)控肝癌的增殖和侵襲轉(zhuǎn)移及其調(diào)控機制，還有待進一步明確。

發(fā)明內(nèi)容

解決的技術(shù)問題：本發(fā)明提供一種人肝癌生物標志物及其應用。

技術(shù)方案：ARHGAP9基因在作為肝癌診斷或預后生物標志物中的應用。

激活ARHGAP9基因表達的物質(zhì)在制備治療肝癌藥物中的應用。