[發明專利]從球等鞭金藻中提取DHA藻油和藻蛋白的工藝

有效

• 申請號: 201811034423.X
• 申請日: 2018-09-06
• 公開（公告）號: CN109022523B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 應金元;應金良;夏瀚;吳善青
• 申請（專利權）人: 杭州園泰生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12P7/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.從球等鞭金藻中提取DHA藻油和藻蛋白的工藝，其特征在于，所述工藝包括如下步驟：

步驟1）種子培養：將培養至對數生長期的球等鞭金藻接種到含有種子培養基的種子罐中，培養48h，收集種子液；

步驟2）發酵培養：將種子液接種到含有發酵培養液的反應池中，22-25℃發酵培養，培養至48h時，往發酵培養液中添加花生四烯酸和沒食子酸丙酯，繼續發酵培養72-96h；所述花生四烯酸的添加量為50-100mg/L；所述沒食子酸丙酯的添加量為20-30mg/L；

步驟3）分離粗油脂和藻蛋白：收集藻液，離心收集沉淀，真空干燥，粉碎，然后添加到氯仿甲醇混合溶液中，添加量為1g粉末：3ml氯仿甲醇混合溶液，微波提取60min，然后進行超聲提取60min，再離心，收集沉淀和氯仿相，將氯仿相置于氮氣中吹干，并且真空干燥，得到粗油脂，將沉淀用兩倍重量的水浸泡10min，然后離心收集藻蛋白，干燥即得；

步驟4）純化油脂：將粗油脂經過陽離子交換樹脂進行離子交換，然后加入活性炭，在氮氣保護下，脫色，將脫色后的油脂進行過濾，收集濾過液，即得DHA藻油。

2.根據權利要求1所述的工藝，其特征在于，所述工藝包括如下步驟：

步驟1）種子培養：將培養至對數生長期的球等鞭金藻接種到含有種子培養基的種子罐中，光照強度5000lux，22-25℃培養，光暗比為18:6，通氣速率為0.2-0.3vvm，培養48h，收集種子液；

步驟2）發酵培養：將種子液按照3-5%的接種量接種到含有發酵培養液的反應池中，22-25℃發酵培養，通氣速率為0.5-1vvm；發酵培養至48h時，往發酵培養液中添加花生四烯酸和沒食子酸丙酯，繼續發酵培養72-96h；整個發酵培養過程中通過流加氨水控制pH在7.0-8.0；

步驟3）分離粗油脂和藻蛋白：收集藻液, 4000r/min離心10min，沉淀用蒸餾水清洗3次，50℃真空干燥，將藻細胞粉碎，然后添加到氯仿甲醇混合溶液中，添加量為1g粉末：3ml氯仿甲醇混合溶液，微波提取，微波功率為150W，提取時間為60min，提取溫度為50℃，然后進行超聲提取，提取溫度為60℃，超聲功率為300W，提取時間為60min，再進行離心，收集沉淀和氯仿相，將氯仿相置于氮氣中吹干，并且真空干燥，得到粗油脂，將沉淀用兩倍重量的水浸泡10min，然后離心收集藻蛋白，干燥即得；

步驟4）純化油脂：將粗油脂經過陽離子交換樹脂進行離子交換，然后加入0.5-0.8wt%的活性炭，在氮氣保護下，150-200rpm攪拌脫色30-60min，將脫色后的油脂通過500-1000目的過濾膜進行過濾，收集濾過液，即得DHA藻油。

3.根據權利要求1或2所述的工藝，其特征在于，所述種子培養基的組分為：硝酸鈉1.5g/L，硅酸鈉0.5g/L，氯化鈉0.3g/L，硫酸銨0.2g/L，磷酸二氫鉀0.1g/L，VB₁ 0.5mg/L，VB₁₂ 0.1mg/L。

4.根據權利要求1或2所述的工藝，其特征在于，所述發酵培養液的組分為：硝酸鈉2g/L，碳酸鈉0.5g/L，氯化銨0.2g/L，氯化鈉0.2g/L，硅酸鈉0.1g/L，磷酸二氫鉀0.1g/L，氯化鐵20mg/L，氯化錳 20mg/L，萘乙酸鈉20mg/L，赤霉素10mg/L。

5.根據權利要求2或3所述的工藝，其特征在于，所述氯仿甲醇混合溶液由氯仿與甲醇按照體積比為2:1混合制得。