[發明專利]人源趨化因子MIP-1α或SDF-1α在真核細胞中的重組表達方法

在審

• 申請號: 201811034129.9
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN109295094A
• 公開（公告）日: 2019-02-01
• 發明（設計）人: 周志誠;柴夢瑩
• 申請（專利權）人: 柴夢瑩
• 主分類號: C12N15/86
• 分類號: C12N15/86;C12N15/12
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 吳莎

本發明公開了一種人源趨化因子MIP?1α或SDF?1α在真核細胞中的重組表達方法，該方法利用載體質粒pSFV2作為攜帶編碼MIP?1α或SDF?1α的外源基因的載體，與包裝質粒pHelper轉染真核細胞后，使得外源基因表達的目的蛋白能夠被修飾而具有生物活性，且采用該方法表達純化出的目的蛋白純度高、收率大、生理和藥理活性強。

技術領域

本發明涉及生物工程領域，具體而言，涉及一種人源趨化因子MIP-1α或SDF-1α在真核細胞中的重組表達方法。

背景技術

目前，具有生物活性的蛋白對真核細胞，尤其是在生物醫藥方面以及在人類生命系統中都具有重要的生理意義。由于，現有原核細胞表達系統不具備蛋白質合成后翻譯和修飾的能力，且低等真核生物的蛋白翻譯和修飾系統與高等真核生物的蛋白翻譯和修飾系統具有很大的差異，因此，原核生物，如細菌，病毒等無法表達出經修飾后的蛋白質如特殊的糖基修飾等具有生物活性的真核蛋白。

發明內容

本發明的目的在于提供一種人源趨化因子MIP-1α或SDF-1α在真核細胞中的重組表達方法，該方法能夠有效地表達出具有生物活性的蛋白。

本發明解決其技術問題是采用以下技術方案來實現的。

一種人源趨化因子MIP-1α或SDF-1α在真核細胞中的重組表達方法，其包括：

將編碼MIP-1α或SDF-1α的外源基因連接至載體質粒，再將載體質粒和包裝質粒轉染包裝細胞，培養轉染后的包裝細胞，得到病毒載體，載體質粒為pSFV2，包裝質粒為pHelper，外源基因的終止子后還連接有特異性標簽，特異性標簽用于編碼至少一個特異性標簽雙連續重復多肽；

將病毒載體轉染到宿主細胞中，經培養后，收集上清液，宿主細胞為真核細胞；以及

離心、純化上清液，得到外源基因表達的具有生物活性的目的蛋白。

本發明提供的編碼MIP-1α或SDF-1α在真核細胞中的重組表達方法的有益效果是：通過采用攜帶編碼MIP-1α或SDF-1α的外源基因的pSFV2載體質粒和pHelper包裝質粒共轉染包裝細胞，進行包裝后，得到攜帶外源基因的病毒載體，再將得到病毒載體轉染真核宿主細胞進行重組表達。通過該方法，使得外源基因在真核宿主細胞表達出的目的蛋白經過了真核生物的蛋白翻譯和修飾系統而具有生物活性；此外，由于外源基因的終止子后還連接的特異性標簽能夠編碼至少一個特異性標簽雙連續重復多肽，這種特異性標簽雙連續重復多肽與高效離子交換樹脂之間的親和性更強，使得所制備的MIP-1α或SDF-1α純度更高、且收率大，生物活性強。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發明的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。

圖1為本發明實施例1的載體質粒pSFV2的圖譜；

圖2為本發明實施例1的包裝質粒pHelper的圖譜；

圖3為本發明實施例1的MIP-1α和SDF-1a蛋白以考馬斯亮藍染色溶液進行顯色的凝膠電泳圖；

圖4為本發明實施例1提供的MIP-1α對CCR5嗜性亞型艾滋病病毒的抑制能力；

圖5是本發明實施例1提供的MIP-1α與HEK-CCR5細胞上的CCR5結合的飽和曲線；

圖6是采用本發明實施例1提供的方法所獲得的SDF-1α對艾滋病CXCR4嗜性亞型病毒株的抑制曲線；

圖7是采用本發明實施例1提供的方法所獲得的SDF-1α與A3-01T淋巴細胞上的CXCR4結合的飽和曲線；