[發(fā)明專利]一種粘紅酵母去乙酰化酶4蛋白的制備及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811033935.4
• 申請(qǐng)日: 2018-09-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110878318A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫晗笑;劉夢(mèng)鴿;利時(shí)雨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州溯原生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70;C12N9/80;A23L33/10;A23K20/189;A61K38/50;A61P3/00;A61P39/06
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• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種通過(guò)大腸桿菌重組表達(dá)制備粘紅酵母sirtuin4蛋白的方法。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過(guò)大腸桿菌重組表達(dá)制備粘紅酵母sirtuin4蛋白的方法，其特征在于：包含以下步驟：

(1）質(zhì)粒的構(gòu)建，質(zhì)粒His-Strep pQE-TriSystem-Rt-sirtuin4由上海吉?jiǎng)P基因公司構(gòu)建；（2）大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備，質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，提取，鑒定；重組大腸桿菌蛋白表達(dá)驗(yàn)證；大腸桿菌發(fā)酵表達(dá)目的蛋白；提純目的蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的通過(guò)大腸桿菌重組表達(dá)制備粘紅酵母sirtuin4蛋白的方法，其特征在于：第（5）項(xiàng)提純目的蛋白的步驟為：（1）用1：10（m:V）的變性溶解緩沖液充分懸浮包涵體；超聲助溶（破碎菌體條件，2個(gè)循環(huán)），室溫保持2h以上，冷凍離心機(jī)8500 rpm離心，收集上清；（2）用不含有SDS的親和層析柱基礎(chǔ)緩沖液稀釋收集到的上清液5倍，同時(shí)加入20% SDS，SDS的終含量為0.6%，混勻，0.22μm濾膜過(guò)濾后備用；（3）用不少于3倍柱床的基礎(chǔ)緩沖液平衡親和柱，直到光吸收平穩(wěn)，然后在親和柱中上樣剛處理好的蛋白樣品；上樣后，用基礎(chǔ)緩沖液沖洗柱床，直到光吸收恢復(fù)；（4）降低洗脫緩沖液流速為上樣和平衡柱流速的一半，收集蛋白洗脫峰；（5）高濃度的SDS處理收集的蛋白洗脫峰。

4.權(quán)利要求3所述的通過(guò)大腸桿菌重組表達(dá)制備粘紅酵母sirtuin4蛋白的方法的提純步驟，其特征在于，SDS-PAGE分析呈現(xiàn)清晰條帶，且蛋白純度約為96%。

5.根據(jù)權(quán)利要求2中所述的任意一種或多種通過(guò)大腸桿菌重組表達(dá)制備粘紅酵母sirtuin4蛋白的步驟制備獲得的sirtuin4蛋白。

6.根據(jù)權(quán)利要求5獲得的sirtuin4蛋白在治療和/或預(yù)防線粒體功能障礙相關(guān)疾病的藥品和功能性食品制備中的應(yīng)用。

7.根據(jù)權(quán)利要求5獲得的sirtuin4蛋白在治療和/或預(yù)防衰老的藥品和功能性食品制備中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求5獲得的sirtuin4蛋白在治療和/或預(yù)防代謝綜合征的藥品和功能性食品制備中的應(yīng)用。