[發(fā)明專利]一種間充質(zhì)干細(xì)胞通用無血清凍存液及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811033321.6
• 申請(qǐng)日: 2018-09-05
• 公開（公告）號(hào): CN109090102A
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 譚汝福
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都匯欣生命科技有限公司
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 成都天匯致遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51264
• 代理人: 韓曉銀

本發(fā)明公開了一種間充質(zhì)干細(xì)胞通用無血清凍存液及其制備方法。上述的凍存液，按照體積百分比由以下組分構(gòu)成：復(fù)方右旋糖酐40注射液0.5％?10％，羥乙基淀粉(130/0.4)1％?10％，甘油5％?30％，無血清培養(yǎng)基25％?70％，血清替代物0.5％?1％，人血白蛋白20％?40％,維生素C 0.05％?1％，維生素E 0.2％?1％，非必須氨基酸0.5％?3％，以上質(zhì)量百分含量總量為100％。本發(fā)明的凍存液在保證間充質(zhì)干細(xì)胞深低溫凍存條件下細(xì)胞活性不低于傳統(tǒng)現(xiàn)有方法前提下，避免現(xiàn)有通用方法某些成分存在的低毒性和補(bǔ)體反應(yīng)帶來的潛在風(fēng)險(xiǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于再生醫(yī)學(xué)生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種間充質(zhì)干細(xì)胞通用無血清凍存液及其制備方法。

背景技術(shù)

間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC,mesenchymal stem cells)是干細(xì)胞家族的重要成員，來源于發(fā)育早期的中胚層，屬于多能干細(xì)胞，MSC最初在骨髓中發(fā)現(xiàn)，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進(jìn)干細(xì)胞植入、免疫調(diào)控和自我復(fù)制等特點(diǎn)而日益受到人們的關(guān)注。

如間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)或體外特定的誘導(dǎo)條件下，可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經(jīng)、肝、心肌、內(nèi)皮等多種組織細(xì)胞，連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子細(xì)胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復(fù)。間充質(zhì)干細(xì)胞臨床應(yīng)用于解決多種血液系統(tǒng)疾病，心血管疾病，肝硬化，神經(jīng)系統(tǒng)疾病，膝關(guān)節(jié)半月板部分切除損傷修復(fù)，自身免疫性疾病等方面取得了重大突破，挽救了更多病患的生命。此外，間充質(zhì)干細(xì)胞在神經(jīng)系統(tǒng)修復(fù)及更多方面具有長遠(yuǎn)的發(fā)展前景。

將間充質(zhì)干細(xì)胞從不同的人體組織中分離培養(yǎng)出來后，再經(jīng)過檢測(cè)鑒定，然后將其凍存于-196℃的深低溫中，以便于在臨床需要時(shí)可以將間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)蘇用于給病人回輸，達(dá)到治療疾病的目的。-196℃深低溫技術(shù)結(jié)合細(xì)胞冷凍保護(hù)液是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞長期保存的最有效方法，也是間充質(zhì)干細(xì)胞未來臨床應(yīng)用的關(guān)鍵之一。

到目前為止，細(xì)胞低溫存儲(chǔ)大多采用“慢凍快融”法，常用的冷凍保護(hù)液(即凍存液)中的二甲基亞砜(DMSO)的存在對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)有毒性作用，且使用動(dòng)物源血清或異體血清有感染異種病毒的風(fēng)險(xiǎn)并引起異體基因免疫反應(yīng)或補(bǔ)體反應(yīng)的可能。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞通用無血清凍存液及其制備方法，在保證間充質(zhì)干細(xì)胞深低溫凍存條件下細(xì)胞活性不低于傳統(tǒng)現(xiàn)有方法前提下，避免現(xiàn)有通用方法某些成分存在的低毒性和補(bǔ)體反應(yīng)帶來的潛在風(fēng)險(xiǎn)。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明公開了一種間充質(zhì)干細(xì)胞通用無血清凍存液，按照體積百分比由以下組分構(gòu)成：復(fù)方右旋糖酐40注射液0.5％-10％，羥乙基淀粉(130/0.4)1％-10％，甘油5％-30％，無血清培養(yǎng)基25％-70％，血清替代物0.5％-1％，人血白蛋白20％-40％,維生素C 0.05％-1％，維生素E0.2％-1％，非必須氨基酸0.5％-3％，以上質(zhì)量百分含量總量為100％。

可選地，無血清培養(yǎng)基為Lonza UItraCULTURE^TM；血清替代物為Pall Ultroser^TM。

本發(fā)明還公開了一種間充質(zhì)干細(xì)胞通用無血清凍存液的制備方法，包括以下步驟：

步驟1、在正常工作的生物安全柜中，按照體積百分比稱量以下組分：復(fù)方右旋糖酐40注射液0.5％-10％，羥乙基淀粉(130/0.4)1％-10％，甘油5％-30％，無血清培養(yǎng)基25％-70％，血清替代物0.5％-1％，人血白蛋白20％-40％,維生素C 0.05％-1％，維生素E0.2％-1％，非必須氨基酸0.5％-3％，以上質(zhì)量百分含量總量為100％；

步驟2、在正常工作的生物安全柜中，空氣凈化LED燈變綠，準(zhǔn)備無菌無熱源血清方瓶，依次加入各組成成分充分?jǐn)嚢杌靹颍?/p>