[發明專利]一種石油烴降解菌及其發酵方法

有效

• 申請號: 201811031326.5
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN109097309B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 林剛;郭鵬;莊建全;紀艷娟
• 申請（專利權）人: 中國石油化工股份有限公司;中國石油化工股份有限公司江蘇油田分公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 董旭東

1.一種石油烴降解菌，其特征在于所述石油烴降解菌為一種類短短芽孢桿菌（Brevibacillus parabrevis），菌株名稱：GWN-2，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物保藏中心，保藏編號：CGMCC No.13903。

2.根據權利要求1所述的一種石油烴降解菌的發酵方法，其特征在于包括如下步驟：

1）將權利要求1的類短短芽孢桿菌無菌環境劃線接種于無菌固體培養基上，33～35℃靜置培養2～3 d，獲得活化的類短短芽孢桿菌的單菌落；

2）將活化的單菌落接種在250mL容量的無菌方形瓶中的固體培養基斜面上，33～35℃靜止培養4～6 d以形成細菌芽孢；將3～4個方形瓶中固體培養基表面芽孢用無菌水洗涮，獲得細菌菌體或孢子懸浮液作為種子液；

3）將步驟2）中獲得的種子液接種于發酵罐內的無菌液體培養基中；發酵條件為溫度：接種溫度35℃；接種1～8h的孢子萌發期，控制溫度34℃；接種8～15h的對數生長期，控制溫度33℃，接種16～35h的遲滯期，控制溫度32℃；通氣量：接種1～8h發酵通氣量為0.1±0.02m³/min，發酵罐罐壓保持在0.2±0.02MPa，接種9～35h的通氣量為3 ±0.02m³/min，罐壓保持在0.3±0.02MPa；發酵過程中不斷攪拌；發酵過程中采用恒定攪拌；

4）在步驟3）的液體培養基中培養30～35h，當顯微鏡染色觀察為密度較高、形態一致的孢子，芽孢率為90%以上時，收集發酵培養液得到石油烴降解菌產品。

3.根據權利要求2所述的一種石油烴降解菌的發酵方法，其特征在于所述固體培養基包括質量百分比由如下的組分：酵母膏0.4～0.6%，蛋白胨0.8～1.2%，瓊脂粉1.5～2.0%，余量為水；各組分整體混合攪拌，pH 7.0～7.2，培養基滅菌條件為：120℃、0.11±0.02Mpa、持續25～35min。

4.根據權利要求2所述的一種石油烴降解菌的發酵方法，其特征在于步驟2）中獲得的孢子懸浮液經70～75℃水浴10～15min以獲得發芽勢強、發育一致的孢子懸浮液作為種子液。

5.根據權利要求2所述的一種石油烴降解菌的發酵方法，其特征在于步驟3）中液體培養基包括質量百分比由如下的組分：豆餅粉1.8～2.5%，淀粉1.0～1.5%，玉米漿0.4～0.6%，硫酸鎂0.05～0.1%，氯化鈉0.1～0.2%，磷酸氫二鉀0.05～0.1%，硫酸鋅0.01～0.015%，泡敵0.02～0.03%，余量為水，pH值7.0～7.2。

6.根據權利要求2所述的一種石油烴降解菌的發酵方法，其特征在于步驟3）中發酵罐的體積為10000L，液體培養基裝填量為5000L。