[發明專利]一種人-15-羥基前列腺素脫氫酶過表達質粒的構建方法及其應用

有效

• 申請號: 201811031254.4
• 申請日: 2018-09-05
• 公開（公告）號: CN109182365B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 李婉;盧春
• 申請（專利權）人: 南京醫科大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/66;A61K38/44;A61P35/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 曹翠珍

一種人?15?羥基前列腺素脫氫酶過表達質粒的構建方法及其應用。該構建方法包括如下步驟：以SEQ ID No：4?5為引物，GenBank登錄號NC_3248的SEQ ID No：1為模板，進行PCR擴增，獲得目的基因；用限制性內切酶Xba I和BamH I對PCR產物和pCDH?CMV?MCS?EF1?copGFP載體進行酶切、純化、連接，轉化至大腸桿菌，即得質粒。與現有技術相比，本發明提供的HPGD在宮頸癌組織中呈現低水平表達，人為過表達宮頸癌細胞的HPGD，能夠明顯抑制細胞的增殖、遷移能力及惡性程度，因此，HPGD在宮頸癌發病過程中發揮重要作用，可作為診療宮頸癌的新的分子標記和藥物靶點。

技術領域

本發明屬于腫瘤分子生物學領域，具體涉及一種人-15-羥基前列腺素脫氫酶過表達質粒的構建方法及其應用。

背景技術

宮頸癌發病率及死亡率在全球女性癌癥中分別位居第三及第四位(CA:a cancerjournal for clinicians.2015；65(2):87-108)。宮頸癌發生的早期常無任何癥狀，不易被察覺，而晚期則伴有不規則的陰道流血、骨盆痛、性交痛等癥狀(Vaccine.2012；30 Suppl5:F55-70；Public Health Genomics.2009；12(5-6):291-307.)。Harald zur Hausen及其同事在宮頸癌組織中首次檢測到HPV16，從而揭示了子宮頸HPV感染與宮頸癌之間的因果聯系，為此，Hausen在2008年被授予諾貝爾生理學或醫學獎(International journal ofcancer.2012；131(10):2349-2359.)。流行病學上，高危型HPV的持續感染已被確定為宮頸癌發生的關鍵致病因子(Nat Rev Cancer.2003；3(3):217-226.)。HPV通過編碼兩種重要的致瘤蛋白E6和E7維持細胞的轉化特性(Journal of Virology.2003；77(19):10186-10201.)。E6可以與E6相關蛋白(E6associated protein，E6AP)形成復合物，進而與腫瘤抑制基因p53結合使其泛素化并降解，最終促進腫瘤的發生(J Infect Dis.2001；183(1):8-15.)。E7可以競爭性結合pRb腫瘤抑制基因，使得與pRb結合的轉錄因子E2F釋放出來，促進細胞周期(Infect Agent Cancer.2010；5:19.)。約有99.7％的宮頸鱗狀細胞癌是由HPV感染引起的(AAPS J.2009；11(1):65-77.)，HPV可通過將病毒DNA整合到染色體DNA上(Viruses.2013；5(2):708-731；J Virol.2008；82(24):12565-12568.)，從而使得原癌基因激活至致癌基因或使腫瘤抑制基因失活。其他危險因素基本與性行為有關，包括性交年齡過小、多個性伴侶以及多次分娩等也加速了宮頸癌的發生，這些因素都會增加感染13種高危型HPV的風險(Proc Natl Acad Sci USA.2006；103(5):1522-1527.)。然而，持續的高風險HPV感染不足以使宿主的上皮細胞永生化，宮頸癌的發生常伴隨著遺傳學的改變(Virology.2009；384(2):400-409.)。