[發(fā)明專利]一株高產(chǎn)γ-聚谷氨酸的枯草芽孢桿菌及其發(fā)酵方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811029894.1
• 申請(qǐng)日: 2018-09-05
• 公開（公告）號(hào): CN109943495A
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊彩梅;郗洪生;曾新福;李慧;劉金松
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江惠嘉生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12P13/02;C12R1/125
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 段俊峰;白淑賢

1.一種用于發(fā)酵生產(chǎn)γ-聚谷氨酸的枯草芽孢桿菌HJBA058，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌的保藏編號(hào)為CGMCC NO：9383，保藏日期為2014年06月25日。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于發(fā)酵生產(chǎn)γ-聚谷氨酸的枯草芽孢桿菌HJBA058，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌能夠代謝產(chǎn)生γ-聚谷氨酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于發(fā)酵生產(chǎn)γ-聚谷氨酸的枯草芽孢桿菌HJBA058生產(chǎn)γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)菌種活化：將枯草芽孢桿菌HJBA058接種至LB固體培養(yǎng)基中，并在37℃的恒溫下培養(yǎng)22-24小時(shí)；

2)種子培養(yǎng)：取適量步驟1中制備的菌種斜面，在無菌條件下，每支斜面均以5毫升無菌水將斜面菌苔清洗下來，以1-3％的接種量接入種子培養(yǎng)液中，在37℃的恒溫下，以20-50r/min的轉(zhuǎn)速振蕩培養(yǎng)12-20小時(shí)；

3)發(fā)酵罐發(fā)酵：取發(fā)酵液體積3％-6％步驟2中的種子液，并接種至30L發(fā)酵罐中的發(fā)酵培養(yǎng)液中，控制溫度在37℃，以20-50r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行振蕩培養(yǎng)48-96小時(shí)；

4)提取γ-聚谷氨酸：將步驟3中的發(fā)酵液的PH值調(diào)節(jié)至3.0-3.5，再將發(fā)酵液溫度降至4℃，并以8000r/min的轉(zhuǎn)速對(duì)其離心15min，去除菌體后得上清液，然后將上清液加入適量乙醇中使其沉淀，最后收集沉淀，將沉淀物置于50℃溫度下真空烘干至恒重，即得γ-聚谷氨酸。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用枯草芽孢桿菌HJBA058生產(chǎn)γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，步驟1所述的LB固體培養(yǎng)基的組份及其濃度如下：蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、氯化鈉5g/L、瓊脂2％，所述LB固體培養(yǎng)基中的PH值為7.0-7.2。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用枯草芽孢桿菌HJBA058生產(chǎn)γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，步驟2所述的種子培養(yǎng)基的組份及其濃度如下：麥芽糖20-50g/L、酵母粉5-10g/L、谷氨酸鈉10-30g/L、氯化鈉10g/L、KH₂PO₄ 5g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，所述種子培養(yǎng)基中的PH值為6.5-7.0。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用枯草芽孢桿菌HJBA058生產(chǎn)γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，步驟3所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的組份及其濃度如下：麥芽糖50-70g/L、酵母粉10-20g/L、谷氨酸鈉80-100g/L、氯化鈉30g/L、KH₂PO₄ 6g/L、MgSO₄·7H₂O 1.5g/L，所述發(fā)酵培養(yǎng)基中的PH值為6.5-7.0。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用枯草芽孢桿菌HJBA058生產(chǎn)γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于，步驟4中所述的乙醇與上清液的體積比為3-5：1，乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95％。