[發明專利]高產酸性蛋白酶的誘變菌株及其用途

有效

• 申請號: 201811027764.4
• 申請日: 2018-09-04
• 公開（公告）號: CN109097308B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 張胤;李肯;趙聃
• 申請（專利權）人: 湖南肯基因科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N15/01;C12N9/50;A23L29/269;A23L23/00;A23L11/45;A23L11/65;A23L11/50;A23C9/13;C12R1/225
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1.一種高產酸性蛋白酶的鼠李糖乳桿菌誘變菌株（Lactobacillus casei strain）KJY11，保藏號為CGMCC No. 15421，保藏日期為2018年03月07日。

2.通過權利要求1所述鼠李糖乳桿菌誘變菌株KJY11，與下列其他誘變菌株進行復配，以生產酸性蛋白酶的方法，步驟包括：

（1）將保藏的誘變菌株分別進行活化培養，其中，活化培養基選自MRS液體培養基，其他誘變菌株選自：干酪乳桿菌（Lactobacillus casei strain）KJY14，保藏號為CGMCC No.15424；玉米乳桿菌（Lactobacillus zeae strain）KJY13，保藏號為CGMCC No .15423；腸膜狀明串珠菌（Leuconostoc mesenteroidesstrain ）KJY15，保藏號為CGMCC No .15425；和，植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum) KJY12，保藏號為CGMCC No .15422；

（2）將活化的誘變菌株培養液，加入預先制備的豆清液或豆漿的培養液中，于37℃下靜置培養5-50h，獲得終發酵液，其中鼠李糖乳桿菌的加入量為10⁸CFU的濃度，另外4種菌種的加入量為10⁷CFU的濃度；

（3）離心過濾菌液，獲得無細菌的上清液；

（4）SDS-PAGE電泳初步驗證結果，然后通過SePhadex過柱進行純化。

3.通過權利要求1所述鼠李糖乳桿菌誘變菌株KJY11，和下列其他誘變乳酸菌株用于制備食品凝固劑的方法，步驟包括：

（1）將誘變株在MRS液體培養基擴大培養后，獲得為活菌密度為10⁸-10⁹CFU/mL的種子培養液；

（2）將種子培養液按3%(v/v)接種量接入預滅菌的豆清液中，于36～38℃下發酵12-24h，獲得液體凝固劑；其中，

其他誘變乳酸菌株選自：植物乳桿菌誘變菌株KJY12，保藏號為CGMCCNo .15422；玉米乳桿菌KJY13，保藏號為CGMCC No .15423；干酪乳桿菌KJY14，保藏號為CGMCC No .15424；腸膜狀明串珠菌KJY15，保藏號為CGMCC No .15425；并且鼠李糖乳桿菌KJY11、植物乳桿菌誘變菌株KJY12、玉米乳桿菌KJY13、干酪乳桿菌KJY14、腸膜狀明串珠菌KJY15的接種比例分別為(1-10):1:1:1:1，以及

所述食品是豆腐、豆花、酸奶或酸湯或酸豆奶。

4.權利要求3的方法，其中步驟還包括：（3）將所述液體凝固劑進行冷凍干燥處理，獲得粉狀的固體凝固劑。

5.權利要求3或4的方法，其中鼠李糖乳桿菌KJY11與其他誘變乳酸菌的接種比例為(5-10):1:1:1:1時，所制備的凝固劑可用于制備富含酸性蛋白酶的保健食品。

6.通過權利要求5的方法所制備的食品凝固劑。

7.通過如權利要求6的食品凝固劑用于凝固液體食品的方法，步驟包括：

（1）將豆漿或牛奶于65-72℃下進行加熱，然后冷卻至36-40℃；

（2）加入1-5%(v/v)液體凝固劑或0.01-0.05%(m/m)的固體凝固劑，以80-100r/min的速度攪拌，直至產生絮狀物或碎花狀物或膠凝狀物，從而制備豆花、酸奶或酸豆奶、豆腐，和/或，

（3）根據所制備的凝固食品類型，選擇凝固深化的持續時間，如豆腐的持續時間為20-30min，酸湯的持續時間為72小時。