[發明專利]一種口蹄疫抗原純化方法

在審

• 申請號: 201811026757.2
• 申請日: 2018-09-04
• 公開（公告）號: CN110872580A
• 公開（公告）日: 2020-03-10
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 無錫拓浦壹生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/02
• 分類號: C12N7/02
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 馮瑞;張紅衛

本發明公開了一種口蹄疫抗原純化方法，包括以下步驟：用聚乙二醇處理滅活抗原；添加助濾劑；初濾；稀釋；二次過濾從而得到滅活抗原純化液，本申請采用PEG處理滅活抗原，由于PEG抓取抗原使其粘合在助濾劑上，在過濾過程中，濾片可對抗原進行攔截，而雜質非目的蛋白則隨初濾的清液排出，而后采用PBS緩沖溶液對攔截后的抗原固物稀釋，使抗原與助濾劑分離。在二次過濾過程中，抗原則會通過濾片，從而完成對抗原的純化。

技術領域

本發明涉及抗原純化領域，特別涉及一種口蹄疫抗原純化方法。

背景技術

口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)，是由口蹄疫病毒(Foot-and-MouthDisease virus,FMDV)引起的一種熱性、急性、高度接觸性動物傳染病。侵染對象為豬、牛、羊等偶蹄動物，易感動物多達70余種，并能形成全球大規模流行，所以被國際獸疫局(OIE)列為A類家畜傳染疾病之首。口蹄疫是最重要的動物傳染病，該病在亞洲、非洲、南美洲的流行極大的限制了這些地區的肉品及其它農產品的出口，阻礙了這些地區的畜牧業、畜產品加工業的發展

接種疫苗是預防該病的重要手段之一，而研制高質量、安全有效的疫苗，不但是決定疫苗免疫效果的關鍵，也是成功預防、控制直至最終消滅口蹄疫的先決條件。口蹄疫疫苗生產工藝復雜，特別是抗原的純化工藝尤其重要，146S抗原是口蹄疫疫苗免疫原性起決定性作用的抗原，比較脆弱，容易破碎或裂解，會導致免疫原性下降或喪失。口蹄疫病毒培養液中有效抗原(146S抗原)含量較低，疫苗注射后免疫持續期短，疫苗免疫效力不穩定。為提高疫苗的免疫效力，通常采用對抗原濃縮，但濃縮的同時，非目的蛋白也會被濃縮，導致不良反應增加。疫苗中的非目的蛋白包括培養細胞時殘留的血清，細胞蛋白和口蹄疫病毒的非結構蛋白。

目前，對抗原純化的常規方法主要是通過對抗原濃縮過濾達到除去細胞碎片、非結構蛋白等，氯仿去除非目的蛋白。

現階段對于口蹄疫抗原純化方法主要是通過過濾除去大顆粒蛋白，過濾過程損失較大；通過氯仿去除非目的蛋白工藝中氯仿毒性較大，每立方米可能會對人體產生慢性毒性的最小濃度10毫升；在上述的兩類純化工藝中，均需要通過離心去除非目的蛋白，但離心過程損失較大，且效率較低，成本較高，不宜放大。上述問題是本領域亟需解決的問題。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種簡化純化步驟、降低純化過程損失的一種口蹄疫抗原純化方法。

為了解決上述技術問題，本發明提供的技術方案是：一種口蹄疫抗原純化方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、將聚乙二醇與滅活抗原液混合，向上述處理過的滅活抗原液中添加助濾劑，形成混合液；

S2、對上述混合液進行初濾，收集固體濾物，所述固體濾物包括助濾劑以及粘合在助濾劑上的抗原；

S3、使用PBS緩沖溶液對上述固體濾物進行洗脫，使抗原與所述助濾劑分離；

S4、二次過濾，濾除助濾劑，收集含有抗原的濾液，得到滅活抗原純化液。

本申請采用PEG處理滅活抗原，由于PEG抓取抗原使其粘合在助濾劑上，在過濾過程中，濾片可對抗原進行攔截，而雜質非目的蛋白則隨初濾的清液排出，而后采用PBS緩沖溶液對攔截后的抗原固洗脫，使抗原與助濾劑分離。在二次過濾過程中，抗原則會通過濾片，從而完成對抗原的純化。

所述步驟S4之后還包括步驟：

S5、對步驟S4中的濾液除菌，得到無菌滅活抗原純化液。

進一步的是：所述步驟S5中除菌中采用過濾除菌，其中過濾孔徑為0.1-0.2μm。

進一步的是：所述步驟S1中，聚乙二醇為聚乙二醇2000、聚乙二醇4000和聚乙二醇6000中的一種或多種。