[發明專利]鑒別四種天南星科藥用植物的熒光PCR檢測試劑盒及應用

有效

• 申請號: 201811025730.1
• 申請日: 2018-09-04
• 公開（公告）號: CN108977571B
• 公開（公告）日: 2022-02-25
• 發明（設計）人: 張全芳;劉艷艷;范陽陽;譚晴晴;陳雪燕;步迅
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院生物技術研究中心
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 濟南誠智商標專利事務所有限公司 37105
• 代理人: 韓百翠

1.一種鑒別四種天南星科藥用植物的熒光PCR檢測試劑盒，其特征是，所述四種天南星科藥用植物為天南星、半夏、虎掌和水半夏；所述熒光PCR檢測試劑盒包括天南星特異引物和特異探針，半夏屬通用特異引物、半夏特異探針、虎掌特異探針，水半夏特異引物和特異探針，內標質控特異引物和特異探針，其中，

天南星特異上游引物TNXF：5’-AAGTGCGGGGTGAGGGAT-3’；

天南星特異下游引物TNXR：5’-CGATCAGCCCATCCTTGC-3’；

天南星特異探針TNXP：5’-ROX-CCTGCCGGGCGATTAACGGCT-BHQ1-3’；半夏屬通用上游引物BXUF：5’-AGTGGTGGACGACGCTCA-3’；

半夏屬通用下游引物BXUR：5’-TTTTCCTCGCTTATTTATATGCTT-3’；

半夏特異探針BXP：5’-JOE-ACCGCGAAGAACCCAGCCGT-BHQ2-3’；

虎掌特異探針HZP：5’-CY3-CCGTGAAGAACCCAGTCGTCCG-BHQ2-3’；

水半夏特異上游引物SBXF：5’-CCCCCACACTCGTCCTATG-3’；

水半夏特異下游引物SBXR：5’-CGATGGTCGGGTTCCTCA-3’；

水半夏特異探針SBXP：5’-FAM-TTGTGCACGGGCGTCATCCA-BHQ1-3’；

內標質粒特異上游引物IMF：5’-ACCGTTACCGAGTCCAGGTG-3’；

內標質粒特異下游引物IMR：5’-TTCGGACTCGATCAGAGCAC-3’；

內標質控特異探針IMP：5’-CY5-AAGTACGCTCCATTGGTGACCTCA-BHQ2-3’。

2.如權利要求1所述的一種鑒別四種天南星科藥用植物的熒光PCR檢測試劑盒，其特征是，所述熒光PCR檢測試劑盒，其中各引物終濃度為0.1～0.5μM，各探針終濃度為0.05～0.25μM。

3.如權利要求2所述的一種鑒別四種天南星科藥用植物的熒光PCR檢測試劑盒，其特征是，所述熒光PCR檢測試劑盒，它還包括：2×TaqMan Master Mix、內標質粒CK、DNA模板和雙蒸水。

4.如權利要求3所述的一種鑒別四種天南星科藥用植物的熒光PCR檢測試劑盒，其特征是，所述熒光PCR檢測試劑盒，其20μL PCR擴增體系為：2×TaqMan Master Mix，各引物終濃度為0.1～0.5μM，各探針終濃度為0.05～0.25μM，內標質粒CK終濃度為10-4ng/μL，0.5～50ng/μL的DNA模板2μL，雙蒸水補足20μL。

5.如權利要求1-4中任一項所述的一種鑒別四種天南星科藥用植物的熒光PCR檢測試劑盒，其特征是，所述熒光PCR檢測試劑盒，還包括天南星陽性對照品、半夏陽性對照品、虎掌陽性對照品、水半夏陽性對照品、陰性對照品和空白對照品。

6.一種用于鑒別四種天南星科藥用植物的檢測方法，其特征是，具體包括以下步驟：

1)提取待測樣本的模板DNA；

2)PCR擴增

使用權利要求1-4中任意一項所述的熒光PCR檢測試劑盒進行PCR擴增；

3)設立陽性對照、陰性對照及空白對照，分析實驗結果，給出第n個循環時的熒光增加值ΔRn與擴增曲線Ct值，根據不同探針熒光信號及擴增曲線Ct值來判定。