[發(fā)明專利]一種增強(qiáng)型治療性抗體及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811024431.6
• 申請日: 2018-09-04
• 公開（公告）號: CN109180798B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉東旭
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢原生藥谷生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K16/18;A61K38/17;A61K39/395;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 武漢維盾知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42244
• 代理人: 蔣悅

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明具體涉及一種增強(qiáng)型治療性抗體由治療性抗體和魚精蛋白組成的構(gòu)建、制備和應(yīng)用。本發(fā)明可以提高治療性抗體的作用時間和彌補(bǔ)治療性抗體的功能缺失。本發(fā)明的增強(qiáng)型治療性抗體對疾病治療有更高的價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種增強(qiáng)型治療性抗體構(gòu)建、制備和應(yīng)用。

背景技術(shù)

魚精蛋白是一種存在于各種動物精巢組織中的堿性蛋白質(zhì)，它是以與DNA結(jié)合的核精蛋白形式存在。目前已經(jīng)從鮭魚、鯡魚等多種魚類及其它水生動物中提取到魚精蛋白。魚精蛋白是一種富含精氨酸的、多聚陽離子的堿性蛋白質(zhì)，溶于水和烯酸，不易溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑，穩(wěn)定性好，加熱不凝固，分為單魚精蛋白、雙魚精蛋白和三魚精蛋白3種，不同魚種魚精蛋白在氨基酸組成比例上有很大的差別，但是它們存在很多相似的特征。魚精蛋白主要在魚類（如鮭魚、鱒魚、鯡魚等）成熟精子細(xì)胞核中作為和DNA結(jié)合的核精蛋白存在，這種結(jié)合使負(fù)電荷沿著DNA的磷酸二酯骨架起中和作用，使相鄰的DNA分子緊密結(jié)合在一起。在哺乳動物中發(fā)現(xiàn)的兩種魚精蛋白P1和P2是最廣泛研究的。P1包裝精子DNA在所有哺乳動物中，而魚精蛋白P2只存在于靈長類動物和嚙齒動物的精子。魚精蛋白主要生物學(xué)作用：（1）促進(jìn)細(xì)胞繁殖和發(fā)育；（2）增強(qiáng)肝功能；（3）抑制腫瘤生長；（4）通過激活補(bǔ)體經(jīng)典途徑，通過特異性抗體與細(xì)胞膜表面相應(yīng)抗原結(jié)合，發(fā)揮補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性，所形成的攻膜復(fù)合物對靶細(xì)胞（如腫瘤細(xì)胞）發(fā)揮裂解效應(yīng)。魚精蛋白在中性和堿性介質(zhì)中顯示出很強(qiáng)的抑菌能力，并有較高的熱穩(wěn)定性，在210℃條件下，加熱1小時仍具有活性，同時抑菌范圍和食品防腐范圍均較廣，它對枯草桿菌、芽孢桿菌、干酪乳桿菌、胚芽乳桿菌、乳酸菌、霉菌、芽抱耐熱菌和革蘭氏陽性菌等均有較強(qiáng)的抑制作用，但對革蘭氏陰性菌抑制效果不明顯。魚精蛋白是激動劑，通過Ca²⁺ Sensing Receptor (CaR)介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)Ca2⁺的增加，增加T細(xì)胞活性。更重要的是，魚精蛋白是市售的，已作為一種臨床治療性藥物，目前的不足之處：（1）應(yīng)用治療范圍非常有限；（2）劑量使用不當(dāng)時，易引起不良反應(yīng)。魚精蛋白只用作用于中和肝素的抗凝活性（例如，體外循環(huán)術(shù)后）和胰島素的穩(wěn)定劑，未發(fā)現(xiàn)用于與治療性抗體融合和聯(lián)合應(yīng)用，也未發(fā)現(xiàn)用于針對免疫系統(tǒng)的治療上。

抗體分為天然抗體、多克隆抗體、單克隆抗體和基因工程抗體，抗體如IgG抗體分子是有兩條V區(qū)和C區(qū)組成。治療性抗體多為基因工程抗體，在臨床應(yīng)用中，治療性抗體和抗體衍生物已廣泛應(yīng)用于抗惡性腫瘤或癌癥治療、免疫性疾病、器官移植和炎癥性疾病的治療。在用基因工程技術(shù)構(gòu)建治療性抗體時，將面臨著工程化改造的治療性抗體C區(qū)片段的問題。雖治療性抗體V區(qū)決定了主要功效作用，但其C區(qū)通過在體內(nèi)對分子結(jié)構(gòu)的影響，發(fā)揮抗體依賴的細(xì)胞毒性作用（ADCC）和補(bǔ)體依賴的細(xì)胞發(fā)揮抗體依賴的細(xì)胞毒性作用（CDC），也同時對基因工程治療性抗體在體內(nèi)的藥效學(xué)、藥動學(xué)和毒理性有影響作用。治療性抗體和抗體衍生物可以分為含有抗體Fc和不含有抗體Fc。含有抗體Fc具有較好的半衰期和穩(wěn)定性，F(xiàn)c介導(dǎo)抗體的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞作用。目前，治療性抗體藥物種類比較多，主要包括：鼠源單抗、人－鼠嵌合抗體、人源化單抗、全人源單抗，其鼠源性蛋白質(zhì)的成分從100%下降為33%乃至0%。治療性人－鼠嵌合抗體的出現(xiàn)使得抗體的人源化程度達(dá)到66%，臨床應(yīng)用會產(chǎn)生人抗鼠抗體（human anti-mouse antibody, HAMA）。確定了HAMA反應(yīng)中最主要的免疫原性成分來自鼠源抗體的C區(qū)，約有90%抗抗體是針對抗體的C區(qū)部分的。最佳的人源化抗體不僅含有鼠源性抗體特異性抗原結(jié)合強(qiáng)度所需的最少的氨基酸數(shù)量（總量的5%－10%），還具有人免疫系統(tǒng)的能力。有些治療性抗體是來源于基因工程抗體，尤其是小分子抗體、雙特異性抗體或雙功能抗體、微型抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、納米抗體等等，其抗體結(jié)構(gòu)中不含有抗體Fc段，缺乏抗體Fc段介導(dǎo)的長循環(huán)效應(yīng)則半衰期端和穩(wěn)定性較差。小分子抗體和雙特異性抗體或雙功能抗體在體內(nèi)的血漿半衰期為2～3小時。治療性抗體也失去抗體的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性作用（主要針對腫瘤細(xì)胞）。因此，如何延長治療性抗體和抗體衍生物在體內(nèi)半衰期和穩(wěn)定性，如何更好地發(fā)揮治療性抗體和抗體衍生物在體內(nèi)治療作用，是治療性抗體和抗體衍生物作為藥物在臨床治療中必須要解決的問題。