[發明專利]營養缺失制備腫瘤細胞凋亡小體疫苗及其抗腫瘤應用

有效

• 申請號: 201811023913.X
• 申請日: 2018-09-04
• 公開（公告）號: CN109010812B
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 劉安軍;王喜玲
• 申請（專利權）人: 慶云堂生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61P35/00;A61P37/04;C12N5/09
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 陳娟

本發明涉及一種營養缺失制備腫瘤細胞凋亡小體疫苗及其抗腫瘤應用，所述腫瘤細胞凋亡小體為腫瘤細胞在缺乏營養的條件下誘導其凋亡所得，以該凋亡小體作為免疫原制備抗腫瘤疫苗。本發明所制造出的抗腫瘤疫苗?“凋亡小體疫苗”作為生物免疫療法或腫瘤預防的一種手段，其在發揮作用時靶向性更強，產生的副作用更小，可通過激活或加強機體自身抗腫瘤免疫，達到殺傷和清除腫瘤細胞的目的，同時此種“凋亡小體疫苗”在激活機體免疫細胞抗腫瘤方面具有廣譜性。

技術領域

本發明屬于抗腫瘤疫苗領域，涉及腫瘤細胞凋亡小體，尤其是一種營養缺失制備腫瘤細胞凋亡小體疫苗及其抗腫瘤應用。

背景技術

目前，癌癥的治療手段主要有手術治療，放射治療和藥物治療等。這些傳統的癌癥治療手段由于其靶向性較差，毒性較強，在殺傷腫瘤細胞的同時也會損傷正常細胞，產生不良反應，因此具有一定的局限性。

腫瘤疫苗是現在的研究熱點之一，有研究利用物理法對細胞滅活進行全細胞疫苗的制備，但此法免疫效果不強，靶向性差且對小鼠的腫瘤抑制率不高。

通過檢索，尚未發現有將腫瘤細胞凋亡小體用于抗腫瘤疫苗的報道。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足之處，提供一種靶向性更強，副作用更小，對腫瘤抑制率更高的腫瘤細胞凋亡小體疫苗及其抗腫瘤應用。

本發明解決技術問題所采用的技術方案是：

本發明提供了一種因細胞營養缺失，如培養基中缺乏葡萄糖等碳源，氨基酸、結合蛋白、激素等氮源以及生長因子或全部的營養因素。

而且，所述的碳源為葡萄糖、有機酸、含碳無機物。

而且，所述的氮源為氨基酸、結合蛋白、胺類。

而且，所述的生長因子為肽激素。

而且，所述的缺乏全部的營養元素是指用生理鹽水替代所有的營養元素。

在多種腫瘤細胞內誘導產生凋亡小體后，從腫瘤細胞中提取制備抗腫瘤疫苗-“凋亡小體疫苗”的方法。其具體操作為：

(1)將腫瘤細胞分別在缺乏氮源、缺乏碳源、缺乏生長因子的培養基中培養48h，因營養成分不足，會誘導細胞發生凋亡。將發生凋亡的腫瘤細胞的培養基收集在50ml離心管中。在900g下離心10min，以除去死細胞和細胞碎片。

(2)將上清轉移至1.5ml EP管中，在12000g下離心30分鐘，得到的沉淀即為凋亡

小體。

(3)為檢測得到的凋亡小體的抗腫瘤效果，對正常小鼠皮下注射凋亡小體疫苗，同時設空白組、模型組、全細胞疫苗組和陽性對照組，接種腫瘤細胞后，繼續飼養15天，實驗期結束。將所有組的小鼠禁食12h后斷頸處死，分別解剖出腫瘤、胸腺及脾臟，檢測小鼠的有關指標，以確定凋亡小體疫苗的抗腫瘤能力。

本發明的優點和積極效果是：

1、本發明針對現有的癌癥治療手段的局限性，以增強腫瘤細胞的免疫原性為目標，激發機體固有的免疫功能和抗癌能力，使機體由被動抗癌向主動抗癌轉變，達到使腫瘤縮小，延長患者生存時間，增強放化療效果的目的。

2、本發明所制造出的抗腫瘤疫苗-“凋亡小體疫苗”作為生物免疫療法的一種手段，其在發揮作用時靶向性更強，產生的副作用更小，可通過激活或加強機體自身抗腫瘤免疫，達到殺傷和清除腫瘤細胞的目的。

附圖說明

圖1為不同時間HepG2細胞的Annexin V-FITC/PI雙染結果；

圖2為不同時間HepG2細胞的線粒體膜電位變化結果；

圖3為不同時間HepG2細胞內活性氧檢測結果。