[發明專利]特異性結合PCSK9抗原的納米抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811022945.8
• 申請日: 2018-09-03
• 公開（公告）號: CN110872353B
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發明（設計）人: 李新洋;劉小盼;張新華;王媚娘;黃謐;楊乃波;楊爽
• 申請（專利權）人: 深圳華大基因科技有限公司;深圳華大生命科學研究院
• 主分類號: C07K16/40
• 分類號: C07K16/40;C12N15/13;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/573;A61K39/395;C12R1/19
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 孫銀行;彭家恩

一種特異性結合PCSK9抗原的納米抗體及其制備方法和應用。本發明的納米抗體，包括重鏈可變區，其由框架區和互補決定區組成，其中互補決定區包括SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：3所示的互補決定區或者SEQ ID NO：4至SEQ ID NO：6所示的互補決定區。本發明的納米抗體與PCSK9抗原的相互作用良好，能夠用于制備抗PCSK9蛋白單抗類藥物，還可用于免疫學檢測PCSK9抗原。

技術領域

本發明涉及抗體技術領域，具體涉及一種特異性結合PCSK9抗原的納米抗體及其制備方法和應用。

背景技術

心血管疾病嚴重威脅著人類，是所有人口族群的首要死因。據國家心血管病中心發布的《中國心血管病報告2015》顯示，我國心血管病(cardiovascular disease，CVD)現患人數已經高達2.9億，每年約有350萬人死于心血管疾病。目前市面上用于降低膽固醇的藥物主要有他汀類(statins)、膽固醇吸收抑制劑、普羅布考等。盡管他汀類藥物心血管疾病治療上表現出色，但隨著其廣泛使用，可能產生的弊端也漸漸被發現。首先，他汀類治療患者仍有較高心血管事件殘余風險，在2年內發生的風險達22.4％；其次，有大量患者無法耐受他汀類藥物，尤其是家族性高膽固醇血癥患者，即使接受最大劑量的最有效的他汀類藥物治療，仍然不能達到降低低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoproteincholesterol，LDL-C)濃度的目的；最重要的是，他汀類藥物存在多種副作用，如引起患者血糖異常、肌肉毒性、記憶和認知障礙等，副作用的發生率高達20％，嚴重的副作用會導致橫紋肌溶解和急性腎功能衰竭，相當一部分患者因不能忍受副作用帶來的肌肉疼痛而終止了治療。

前蛋白轉化酶枯草溶菌素9(Proprotein convertase subtilisin/kexin type9，PCSK9)，屬于枯草蛋白酶亞家族的一種新的前蛋白轉化酶，是常染色體顯性家族性高膽固醇血癥的重要影響因子之一。研究發現，PCSK9除了能影響血漿膽固醇水平，調節神經細胞的凋亡，還與炎癥反應有一定的相關性。目前對于PCSK9的研究主要集中在對肝臟脂質代謝的調節功能。前期的研究顯示，PCSK9可通過促進肝細胞的低密度脂蛋白受體(low-density lipoprotein receptor，LDL-R)的降解，調節肝臟脂質代謝，進而影響血漿中低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)的水平。但PCSK9存在兩種突變類型，功能獲得型突變和功能缺失型突變。族群試驗顯示，若干PCSK9“獲得功能”的突變常發生于體染色體顯性高膽固醇血癥的個體，而PCSK9“失去功能”的突變則與血漿膽固醇減少有，PCSK9功能缺失型突變個體患冠心病的風險明顯降低。2005年，Hobbs等在Dallas Heart Study上報道了攜帶PCSK9無義突變基因的個體中LDL-C水平會比一般人低28％；在2006，Hobbs等又發表PCSK9基因突變對冠心病的作用，該結果基于一項動脈粥樣硬化風險調查，他們對9523個白人和3363個非洲裔美國人進行了長達15年的跟蹤觀察，發現缺失1個或2個PCSK9功能基因的人群的冠心病的發病率顯著低于普通人群。CopenhagenHeart Study發現PCSK9基因的功能性缺失會使LDL-C水平下降11-15％，冠心病患病率下降6-46％。Zimbabwe等報道了PCSK9的缺失突變可使非洲女性的LDL-C水平下降27％。PCSK9抑制劑提供了一種全新的治療模式來對抗LDL-C，被視為他汀類之后降脂領域取得的最大進步。PCSK9抑制劑的出現，為那些服用他汀類藥物時出現嚴重副作用的患者，及他汀類藥物治療無法達到LDL-C目標水平的患者，如遺傳性高膽固醇血癥患者帶來了福音。