[發(fā)明專利]一種BAHD酰基轉(zhuǎn)移酶基因及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811015272.3
• 申請日: 2018-08-31
• 公開（公告）號: CN109022460B
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發(fā)明（設計）人: 巴桑玉珍;王玉林;原紅軍;徐齊君;曾興權(quán);楊春葆;于明寨;扎桑;韋澤秀;頓珠加布;尼瑪扎西
• 申請（專利權(quán)）人: 西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學院農(nóng)業(yè)研究所;西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學院
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12N9/10;A01H5/00;A01H6/46;A01H6/82;C12R1/19
• 代理公司: 成都高遠知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發(fā)明提供了一種青稞來源的BAHD酰基轉(zhuǎn)移酶基因HVUL2H29914，本發(fā)明還提供了包含該基因的重組載體、重組菌、轉(zhuǎn)基因植物的制備方法，本發(fā)明還提供了BAHD酰基轉(zhuǎn)移酶及其制備方法。本發(fā)明BAHD酰基轉(zhuǎn)移酶可以用阿魏酰輔酶A作為酰基供體、色氨酸作為酰基受體，合成阿魏酰色胺，應用前景優(yōu)良。

技術(shù)領域

本發(fā)明涉及基因工程領域，具體涉及一種青稞來源的BAHD酰基轉(zhuǎn)移酶基因的應用。

背景技術(shù)

阿魏酰色胺具有抗炎、抗腫瘤和抑菌的作用，在紅花等藥用植物中有微量的分布。由于藥用資源有限，阿魏酰色胺的來源需要進一步開發(fā)。

青稞，青稞英文名：hulless barley。是禾本科大麥屬的一種禾谷類作物，因其內(nèi)外穎殼分離，籽粒裸露，故又稱裸大麥、元麥、米大麥。主要產(chǎn)自中國西藏、青海、四川、云南等地，是藏族人民的主要糧食。

青稞還具有一定的藥用價值，而現(xiàn)有技術(shù)未見青稞中含有阿魏酰色胺的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明通過對青稞的研究，發(fā)現(xiàn)了一種新的青稞BAHD酰基轉(zhuǎn)移酶基因，其可以有效將阿魏酰基輔酶A和色氨酸轉(zhuǎn)化為阿魏酰色胺。

本發(fā)明提供了一種基因(BAHD酰基轉(zhuǎn)移酶基因HVUL2H29914)，其核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

本發(fā)明提供了一種重組載體，它包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

前述的重組載體，所述重組載體是重組pGEX-6P-1(Novagen)。

前述的重組菌，它包含前述的重組載體。

前述的重組菌，所述重組菌為Transetta(DE3)。

本發(fā)明還提供了一種蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

前述蛋白的方法，它是采用前述重組菌發(fā)酵制備。

前述蛋白的方法，步驟如下：

(1)取前述重組菌，活化，得菌液；

(2)將菌液接種到LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)，3～4h后，加入IPTG誘導劑誘導培養(yǎng)，收集菌體；

(3)破菌，離心，取上清，純化，即可。

步驟(1)中，所述菌液的濃度為1×10⁶～10⁷cfu/ml；優(yōu)選地，所述活化是采用含有Amp的LB培養(yǎng)基培養(yǎng)培養(yǎng)，培養(yǎng)時間是6-10小時，培養(yǎng)溫度為37℃；

和/或，步驟(2)中，所述菌液的接種比例為1:50；所述培養(yǎng)的溫度是37℃，轉(zhuǎn)速為200rpm；所述IPTG的濃度為1mol/L，加入量為培養(yǎng)液的1/100000；誘導培養(yǎng)的溫度是20℃，轉(zhuǎn)速為160rpm；

和/或，步驟(3)中，所述分離純化的方法為GST標簽融合蛋白純化方法；優(yōu)選地，所述純化方法為：取上清，上樹脂柱，穿流2次；采用Lysis buffer沖洗樹脂去除雜蛋白；用15mmol/L還原型谷胱甘肽溶液洗脫，得蛋白；進一步優(yōu)選地，所述樹脂是GlutathioneSepharoseTM 4B樹脂；所述還原型谷胱甘肽溶液是還原型谷胱甘肽溶于Lysis buffer得到的溶液。

前述的基因片段、重組載體、重組菌、蛋白在制備阿魏酰色胺方面的用途。

本發(fā)明還提供了一種制備阿魏酰色胺的方法，它是采用前述的基因片段、重組載體、重組菌、蛋白，以阿魏酰基輔酶A作為酰基供體，色氨酸作為供體，制備阿魏酰色胺。

本發(fā)明還提供了一種生產(chǎn)阿魏酰色胺的轉(zhuǎn)基因植物的構(gòu)建方法，其特征在于：取前述的基因，轉(zhuǎn)入植物中，獲得表達前述蛋白的植株，即可。