[發明專利]副豬嗜血桿菌和豬肺炎支原體二聯滅活疫苗的生產方法

有效

• 申請號: 201811015221.0
• 申請日: 2018-08-31
• 公開（公告）號: CN109010814B
• 公開（公告）日: 2021-11-16
• 發明（設計）人: 徐高原;陳波;金建云;周明光;潘建剛;盧強;余蕾;范金秀
• 申請（專利權）人: 武漢科前生物股份有限公司
• 主分類號: A61K39/102
• 分類號: A61K39/102;A61K39/02;A61P31/04;C12N1/20;C12R1/35
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;王璐

本發明屬于疫苗生產技術領域，具體公開了副豬嗜血桿菌和豬肺炎支原體二聯滅活疫苗的生產方法。本發明利用生物反應器進行豬肺炎支原體的發酵培養，利用發酵罐進行血清4型副豬嗜血桿菌和血清5型副豬嗜血桿菌的發酵培養；將發酵培養后的菌液滅活、濃縮、純化，再按一定比例混合，并加入免疫增強劑和疫苗佐劑，得到副豬嗜血桿菌和豬肺炎支原體二聯滅活疫苗。本發明生產的疫苗組合物具有特異性強、免疫性好的特點，可起到一針防二種疾病的目的，該技術方案更加經濟實用，避免多次接種，節約了疫苗成本和人工成本，特別適用于預防和治療混合感染病癥的養殖場。

技術領域

本發明屬于疫苗生產技術領域，具體地說，涉及副豬嗜血桿菌和豬肺炎支原體二聯滅活疫苗的生產。

背景技術

副豬嗜血桿菌病近年來一直是豬病中最重要的細菌病之一，嚴重影響我國養豬業的健康發展。副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis，HPS)能引起豬的多發性漿膜炎、關節炎和腦膜炎，可以影響從2周齡的哺乳仔豬到4月齡的育肥豬，主要在斷奶后和保育階段發病，多見于5～8周齡的豬，發病率一般在10％～15％，嚴重時病死率高達50％。本發明對2013～2017年分離的所有細菌進行分析，結果表明副豬嗜血桿菌分離率達到30.8％左右，其中分離的副豬嗜血桿菌血清4型占26.9％，血清5型占25.5％，說明副豬嗜血桿菌仍然是威脅養豬業最重要的細菌性疾病之一，副豬嗜血桿菌血清4型和5型仍是我國流行的主要血清型。另外，副豬嗜血桿菌病易與豬鏈球菌病、豬繁殖與呼吸障礙綜合癥、豬支原體肺炎以及其它疾病發生混合或繼發感染。

豬支原體肺炎是由豬肺炎支原體引起的呼吸道疾病。該疾病導致仔豬生長緩慢和飼養效率降低，是養豬業經濟損失的重要原因。該疾病導致持續幾周的持續性咳嗽、被毛失去光澤、生長遲緩和外觀不壯實。雖然該疾病的死亡率低，但受感染的豬常常易于受到機會病原體的繼發感染，從而導致死亡或應激。

豬支原體肺炎可引起豬的免疫抑制，從而使機體更易感染其他病原，這也是副豬嗜血桿菌病與豬支原體肺炎病混合感染的重要原因，混合感染病豬的病死率也將大大提高，有的可達25％～40％。

但是，由于聯合疫苗(疫苗組合物)，如二聯疫苗或三聯疫苗中，多種抗原相互間存在干擾或影響，導致目前市場上還未見有副豬嗜桿菌病、豬支原體肺炎二聯苗的產品。

不僅如此，現有文獻中記載的涉及豬支原體肺炎的疫苗，多利用發酵罐進行培養，由于培養時間長，增加人力和生產成本,而且加大污染風險。

因此，急需提供一種在獲得較高免疫原性的同時，縮短培養時間，降低生產成本的二聯疫苗的生產方法，以預防由豬肺炎支原體引起的豬肺炎支原體、或副豬嗜血桿菌引起的副豬嗜血桿菌病、或二種混合感染的疾病。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種副豬嗜血桿菌和豬肺炎支原體二聯滅活疫苗的生產方法。

為了實現本發明目的，本發明的技術方案如下：

第一方面，本發明提供副豬嗜血桿菌和豬肺炎支原體二聯滅活疫苗的生產方法，其特征在于，利用生物反應器進行豬肺炎支原體的發酵培養，利用發酵罐進行血清4型副豬嗜血桿菌和血清5型副豬嗜血桿菌的發酵培養；將發酵培養后的菌液滅活，再分別將血清4型副豬嗜血桿菌和血清5型副豬嗜血桿菌通過管式離心機離心；將豬肺炎支原體通過膜包濃縮純化，根據離心前細菌計數結果，用生理鹽水調整合適菌液濃度后混合，再加入免疫增強劑CIA 303，最后再與疫苗佐劑Summit-S550混合乳化，得到副豬嗜血桿菌和豬肺炎支原體二聯滅活疫苗。