[發明專利]肺腺癌檢測試劑盒及檢測TULP2基因甲基化水平的方法

在審

• 申請號: 201811000101.3
• 申請日: 2018-08-30
• 公開（公告）號: CN108998529A
• 公開（公告）日: 2018-12-14
• 發明（設計）人: 沈楠;杜白露;潘藝;莫茜;陶悅;周輝;馬靖;殷敏智;顧松;徐敏;曹清;干馳;趙瑞珂
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬上海兒童醫學中心
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 上海韌辰專利代理有限公司 31331
• 代理人: 劉秋蘭

1.一種肺腺癌檢測試劑盒，其特征在于所述肺腺癌檢測試劑盒包括如SEQ ID NO:1序列所示的TULP2基因正向引物、如SEQ ID NO:2序列所示的TULP2基因反向引物、如SEQ IDNO:3序列所示的甲基化探針、如SEQ ID NO:4序列所示的非甲基化探針；和實時熒光定量PCR檢測試劑。

2.如權利要求1所述的肺腺癌檢測試劑盒，其特征在于所述實時熒光定量PCR檢測試劑為DNA聚合酶預混液。

3.如權利要求1所述的肺腺癌檢測試劑盒，其特征在于所述DNA聚合酶預混液具體為：DNA聚合酶、PCR緩沖液、dNTP混合液和熒光物質染料。

4.如權利要求1所述的肺腺癌檢測試劑盒，其特征在于所述TULP2基因正向引物的體積為1～3μL優選2μL，濃度為0.3～0.5μm優選0.4μm；TULP2基因反向引物的體積為1～3μL優選2μL，濃度為0.3～0.5μm優選0.4μm；甲基化探針的體積為0.4～0.6μL優選0.5μL，濃度為0.1～0.3μm優選0.2μm；和非甲基化探針的體積為0.4～0.6μL優選0.5μL，濃度為0.05～0.2μm優選0.1μm。

5.如權利要求2所述的肺腺癌檢測試劑盒，其特征在于所述DNA聚合酶預混液25μL。

6.一種檢測TULP2基因甲基化水平的方法，其特征在于包括如下步驟：

S1，提取生物樣品中的DNA；

S2，重亞硫酸鹽轉化提取到的DNA；

S3，使用權利要求1所述的肺腺癌檢測試劑盒實時熒光定量PCR擴增轉化后的DNA，以檢測TULP2基因甲基化水平。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于步驟S1中采用磁珠法提取生物樣本中的DNA。

8.如權利要求6所述的方法，其特征在于實時熒光定量PCR擴增條件是預變性95℃30min循環1次；變性95℃10s，退火延伸56℃30s，循環50次。

9.如權利要求6所述的方法，其特征在于所述生物樣品為可疑癌組織以及可疑癌旁組織。