[發(fā)明專利]一種豬凍精用預(yù)稀釋液

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810994254.8
• 申請日: 2018-08-30
• 公開（公告）號: CN108782545A
• 公開（公告）日: 2018-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛世明;龍清孟;周迪;陳光侯;朱寬峰;龔菲;李平;譚曉山;李俊;陳大芳;王欽;李明勇;楊開;劉虓;肖純猛;唐明宗;段懷洋;趙慶福
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州省種畜禽種質(zhì)測定中心
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 貴陽貴知知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 52115
• 代理人: 施冬蘭;曾香蘭

本發(fā)明涉及一種豬凍精用預(yù)稀釋液，屬于豬精液的冷凍保存技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以水為溶劑，各溶質(zhì)及其濃度分別為：Tris 230?270mmol/L、檸檬酸或檸檬酸水合物70?90mmol/L；葡萄糖或葡萄糖水合物55?70mmol/L，半胱氨酸鹽酸或半胱氨酸或N?乙酰半胱氨酸1?5mmol/L。在本發(fā)明中以半光氨酸鹽酸為抗氧化劑，極大地增強(qiáng)了精子的抗氧化能力，進(jìn)而增強(qiáng)精子的抗凍性，提高豬冷凍精液的活率、活力等技術(shù)指標(biāo)，最終提高凍精制作的合格率，其中葡萄糖作為精子的主要能源物質(zhì)，檸檬酸和Tris相互配合主要作為緩沖溶液使用，維持穩(wěn)定的pH和滲透壓，降低精子活動(dòng)，從而延長精子壽命并保持受精能力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種豬凍精用預(yù)稀釋液，屬于豬精液的冷凍保存技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

豬的人工授精(artificial insemination，AI)技術(shù)，即利用人工方法采集公豬的精液，對其進(jìn)行品質(zhì)檢查，將活率合格的原精進(jìn)行稀釋、分裝、17℃恒溫保存等，再用輸精管將精液輸送到發(fā)情母豬生殖道內(nèi)，使其受孕。人工授精可提高公豬的配種效率，與本交相比，人工授精時(shí)一頭優(yōu)秀種公豬每年配種的母豬可提高10～20倍。由于良種公豬利用率的提高，加速了品種改良；減少公豬的飼養(yǎng)量，節(jié)省了飼養(yǎng)管理費(fèi)用；可克服自然交配的難點(diǎn)，如公、母豬體格相差太大和某些生殖道異常等困難；可擴(kuò)大優(yōu)秀公豬在時(shí)間和地域上的利用率，為優(yōu)秀種豬精液的資源共享提供便利條件；此外，人工授精還可以有效防止公、母豬多種疫病接觸傳染的可能。正是由于人工授精在養(yǎng)豬生產(chǎn)中具有很多優(yōu)越性，使得這一技術(shù)在許多養(yǎng)豬發(fā)達(dá)國家得到大力推廣。然而，國內(nèi)外在豬的人工授精中所用的精液多為常溫(15～20℃)液態(tài)保存鮮精液，配種時(shí)的精子活力較高(0.6～0.8)、配種母豬的受胎率較高(75％～85％)，但其鮮精一是不能長期保存(保存期一般在3～5天)，二是不便于遠(yuǎn)距離運(yùn)輸，因此，無法充分發(fā)揮優(yōu)秀種公豬尤其是頂級種公豬的種用價(jià)值。

近年來，人工授精技術(shù)在豬繁育上的應(yīng)用，已經(jīng)從采用常溫精液輸配技術(shù)，逐漸轉(zhuǎn)移到凍精制作和凍精輸配技術(shù)上。凍精制作是指利用干冰(-79℃)、液氮(-196℃)等作制冷源，將精液特殊處理后冷凍，保存在超低溫(-79℃或-196℃)的狀態(tài)下，達(dá)到長期保存的目的。目前，這項(xiàng)技術(shù)再牛、羊上早已廣泛推廣應(yīng)用，但由于豬的精液自身抗氧化能力的不足，豬的精子耐凍性差，公豬精液冷凍制作后，經(jīng)解凍并稀釋處理，檢測豬的精子活率嚴(yán)重下降，導(dǎo)致豬的精液冷凍技術(shù)在豬場生產(chǎn)實(shí)踐中始終難以廣泛推廣應(yīng)用。有研究人員認(rèn)為，氧化損傷是導(dǎo)致這個(gè)現(xiàn)象產(chǎn)生的主要因素之一。氧化損傷主要是由精子活性氧(如過氧化氫，超氧化物陰離子，羥自由基)水平的升高引起，活性氧能夠破壞精子的蛋白、DNA和質(zhì)膜中脂質(zhì)。公豬精液對活性氧敏感性的原因是因?yàn)槟ぶ|(zhì)中不飽和脂肪酸的濃度相對較高，而精漿的天然抗氧化能力相對較低。特別是，在冷凍保存過程中產(chǎn)生的超氧自由基將導(dǎo)致精子膜的脂質(zhì)過氧化，膜的完整性降低和精子凋亡的增加，從而影響精子活力。Li J也在文獻(xiàn)《Seminal plasma antioxidants are directly involved in boar spermcryotolerance》指出精液的抗凍性與精液抗氧化能力有關(guān)，現(xiàn)階段，在豬冷凍精液制作過程中的預(yù)稀釋步驟多采用Mondena、BTS、Androhep plus等鮮精稀釋液，或者基于這些鮮精稀釋液的配方進(jìn)行了微調(diào)，這些稀釋液不僅成分復(fù)雜，而且不能有效增強(qiáng)精液的抗氧化性，制作凍精的合格率極低。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種豬凍精用預(yù)稀釋液，可有效保護(hù)凍精制作過程中的精子抵抗氧化損傷，從而提高凍精制作的合格率，擴(kuò)大優(yōu)良種公豬的利用效率，減少公豬的飼養(yǎng)量，降低豬場生產(chǎn)成本，顯著增加經(jīng)濟(jì)效益。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的豬凍精用預(yù)稀釋液以水為溶劑，溶質(zhì)及其濃度為：Tris230-270mmol/L、檸檬酸70-90mmol/L、葡萄糖55-70mmol/L、半胱氨酸鹽酸1-5mmol/L。