[發(fā)明專利]枯草芽孢桿菌M406及其在制備細菌素和纖維素酶中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810988231.6
• 申請日: 2018-08-28
• 公開（公告）號: CN109161498B
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 晏向華;王新鍇;胡軍;侯奇良;牛耀嶸
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/00;C12N9/42;A61K38/16;A61P31/04;C12R1/125
• 代理公司: 武漢開元知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42104
• 代理人: 樊戎;馮超

1.一種枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)M406菌株，其保藏編號為CCTCC NO：M2018234。

2.一種權(quán)利要求1所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)M406菌株在制備細菌素和纖維素酶中的應(yīng)用。

3.一種利用權(quán)利要求1所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)M406菌株制備細菌素的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)菌種活化：將枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)M406菌株接于LA固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到單菌落；

2)種子液制備：將挑取的單菌落接種于LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，至菌株對數(shù)生長中期，得到種子液；

3)液體搖瓶發(fā)酵：將種子液接入滅菌后的產(chǎn)細菌素培養(yǎng)基中培養(yǎng)發(fā)酵，得到發(fā)酵液，其中，種子液的接種量為0.5～2％；所述產(chǎn)細菌素培養(yǎng)基配方：蛋白胨10g/L、酵母浸出物5g/L、NaCl 10g/L；

4)細菌素粗提：微濾膜去除菌體，添加硫酸銨使發(fā)酵液飽和度為20～40％，沉淀培養(yǎng)液，離心再用PBS溶解沉淀，得到細菌素粗提液；

5)對細菌素粗提液在無菌狀態(tài)下進行過濾除菌，得到細菌素。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備細菌素的方法，其特征在于：所述步驟1)中，培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度為30～37℃，時間為12～24h，

LA固體培養(yǎng)基的濃度組成為：胰蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，NaCl 10g/L，瓊脂15g/L；

所述步驟2)中，培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度為30～37℃、時間為5～24h、搖床轉(zhuǎn)速為150～220r/min；

LB液體培養(yǎng)基配方：胰蛋白胨10g/L、酵母浸出物5g/L、NaCl 10g/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述制備細菌素的方法，其特征在于：所述步驟3)中，培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度為30～37℃，搖床轉(zhuǎn)速為150～220r/min、時間為12～24h。

6.一種利用權(quán)利要求1所述枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)M406菌株制備纖維素酶的方法，包括以下步驟：

1)菌種活化：將枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)M406菌株接于LA固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到單菌落；

2)種子液制備：將挑取的單菌落接種于LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，至菌株對數(shù)生長中期，得到種子液；

3)液體搖瓶發(fā)酵：將種子液接入滅菌后的產(chǎn)纖維素酶培養(yǎng)基中培養(yǎng)發(fā)酵，種子液的接種量為0.5～2％；產(chǎn)纖維素酶培養(yǎng)基配方：MgSO₄·7H₂O 0.3g，KH₂PO₄ 1g，K₂HPO₄·3H₂O1.5g，NaCl 1g，酵母粉0.5g，蛋白胨20g，CMC-Na 20g，加水定容至1L；

4)纖維素酶粗提：收集發(fā)酵液，利用孔徑為0.45μm微濾膜去除菌體，得到纖維素酶粗提液；

5)對纖維素酶粗提液進行冷凍干燥，即得到纖維素酶。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述制備纖維素酶的方法，其特征在于：所述步驟1)中，培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度為30～37℃，時間為12～24h，

LA培養(yǎng)基的濃度組成為：胰蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，NaCl 10g/L，瓊脂15g/L；

所述步驟2)中，培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度為30～37℃、時間為5～24h、搖床轉(zhuǎn)速為150～220r/min；

LB液體培養(yǎng)基配方：胰蛋白胨10g/L、酵母浸出物5g/L、NaCl 10g/L。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述制備纖維素酶的方法，其特征在于：所述步驟3)中，培養(yǎng)溫度為30～37℃，搖床轉(zhuǎn)速為150～220r/min、時間為12～24h。