[發(fā)明專利]一種多肽作為流感疫苗佐劑提高流感疫苗免疫效果的用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810985429.9
• 申請日: 2018-08-28
• 公開（公告）號: CN109082453B
• 公開（公告）日: 2022-10-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 盧珊珊;徐玉琳
• 申請（專利權(quán)）人: 南京賽爾健生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K1/34
• 分類號: C07K1/34;C12P21/06;A61K39/39;A61K39/145;A61P31/16
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本發(fā)明涉及一種多肽作為流感疫苗佐劑提高流感疫苗免疫效果的用途。疫苗佐劑在誘導(dǎo)免疫反應(yīng)中的主要作用是提高機體免疫系統(tǒng)，提高抗原或者是免疫原的免疫應(yīng)答反應(yīng)。疫苗佐劑可以激活固有免疫反應(yīng)以及提高抗原對免疫系統(tǒng)的遞承和刺激作用，進而激活適應(yīng)性免疫應(yīng)答。本發(fā)明提供的牛骨髓酶解多肽A、B、D雖然本身對流感病毒感染鼠無保護作用，但是卻可以有效增強HA對流感病毒感染鼠的保護作用，因而可以用作流感疫苗免疫佐劑。現(xiàn)有技術(shù)沒有報道過本發(fā)明技術(shù)方案。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及疫苗領(lǐng)域，尤其涉及流感疫苗免疫佐劑。

背景技術(shù)

流感是常見的呼吸道傳染病，可引起較高的死亡率，尤其是新型毒株的出現(xiàn)，可引起世界范圍內(nèi)的流感大流行。接種流感疫苗是預(yù)防流感感染和阻止大流行的主要手段。臨床中主要的流感疫苗有亞單位疫苗、滅活疫苗以及重組疫苗。這些流感疫苗對于同一亞型的流感病毒能夠起到很好的保護作用。

使用免疫佐劑增強高純化疫苗的免疫原性，是增強疫苗免疫效果的有效方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種多肽作為流感疫苗佐劑提高流感疫苗免疫效果的用途。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：

20～30kDa酶解多肽：

一種酶解多肽，通過如下方法制備得到：

步驟S1，將牛骨髓粉末用超純水溶解；

步驟S2，加入堿性蛋白酶酶解，酶解條件為：pH值，8.5；酶解溫度，52℃；酶解時間，10小時；酶解完成后于沸水中水浴15min，12000r/min、4℃條件下離心15min，仔細(xì)收集上清即為BBM酶解液；

步驟S3，選取孔徑為30kDa和20kDa的超濾膜對BBM酶解液超濾，收集20～30kDa分子量段的超濾液命名為BBM-2；

步驟S4，再將BBM-2組分經(jīng)孔徑為150Da的納濾膜進行脫鹽處理，冷凍干燥即得；

優(yōu)選地，牛骨髓粉末的制備方法為：取新鮮的牛骨髓用冷水和溫水沖洗3～5次，剔除骨頭碎片和肉后存于-20℃使其硬化，加1:5比例液氮粉碎成粉末，-40℃?zhèn)溆谩?/p>

優(yōu)選地，堿性蛋白酶活力單位為2.4AU/g。

優(yōu)選地，步驟S1配成質(zhì)量濃度為100g/L。

優(yōu)選地，步驟S2中每100g牛骨髓粉末對應(yīng)添加堿性蛋白酶4.5g。

上述酶解多肽用于制備流感疫苗佐劑的用途。

10～20kDa酶解多肽：

一種酶解多肽，通過如下方法制備得到：

步驟S1，將牛骨髓粉末用超純水溶解；

步驟S2，加入堿性蛋白酶酶解，酶解條件為：pH值，8.5；酶解溫度，52℃；酶解時間，10小時；酶解完成后于沸水中水浴15min，12000r/min、4℃條件下離心15min，仔細(xì)收集上清即為BBM酶解液；

步驟S3，選取孔徑為20kDa和10kDa的超濾膜對BBM酶解液超濾，收集10～20kDa分子量段的超濾液命名為BBM-3；

步驟S4，再將BBM-3組分經(jīng)孔徑為150Da的納濾膜進行脫鹽處理，冷凍干燥即得；

優(yōu)選地，牛骨髓粉末的制備方法為：取新鮮的牛骨髓用冷水和溫水沖洗3～5次，剔除骨頭碎片和肉后存于-20℃使其硬化，加1:5比例液氮粉碎成粉末，-40℃?zhèn)溆谩?/p>

優(yōu)選地，堿性蛋白酶活力單位為2.4AU/g。

優(yōu)選地，步驟S1配成質(zhì)量濃度為100g/L。