[發(fā)明專利]一種多肽及用作流感疫苗免疫佐劑的用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810985423.1
• 申請日: 2018-08-28
• 公開（公告）號: CN109097425B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發(fā)明（設計）人: 盧珊珊;徐玉琳
• 申請（專利權）人: 浙江康嘉基因技術有限公司
• 主分類號: C07K1/34
• 分類號: C07K1/34;C12P21/06;A61K39/39;A61K39/145;A61P31/16
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 楊敬

本發(fā)明涉及一種多肽及用作流感疫苗免疫佐劑的用途。疫苗佐劑在誘導免疫反應中的主要作用是提高機體免疫系統(tǒng)，提高抗原或者是免疫原的免疫應答反應。疫苗佐劑可以激活固有免疫反應以及提高抗原對免疫系統(tǒng)的遞承和刺激作用，進而激活適應性免疫應答。本發(fā)明提供的牛骨髓酶解多肽A、B、D雖然本身對流感病毒感染鼠無保護作用，但是卻可以有效增強HA對流感病毒感染鼠的保護作用，因而可以用作流感疫苗免疫佐劑。現(xiàn)有技術沒有報道過本發(fā)明技術方案。

技術領域

本發(fā)明涉及疫苗領域，尤其涉及流感疫苗免疫佐劑。

背景技術

流感是常見的呼吸道傳染病，可引起較高的死亡率，尤其是新型毒株的出現(xiàn)，可引起世界范圍內的流感大流行。接種流感疫苗是預防流感感染和阻止大流行的主要手段。臨床中主要的流感疫苗有亞單位疫苗、滅活疫苗以及重組疫苗。這些流感疫苗對于同一亞型的流感病毒能夠起到很好的保護作用。

使用免疫佐劑增強高純化疫苗的免疫原性，是增強疫苗免疫效果的有效方法。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種多肽及用作流感疫苗免疫佐劑的用途。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了以下技術方案：

20～30kDa酶解多肽：

一種酶解多肽，通過如下方法制備得到：

步驟S1，將牛骨髓粉末用超純水溶解；

步驟S2，加入堿性蛋白酶酶解，酶解條件為：pH值，8.5；酶解溫度，52℃；酶解時間，10小時；酶解完成后于沸水中水浴15min，12000r/min、4℃條件下離心15min，仔細收集上清即為BBM酶解液；

步驟S3，選取孔徑為30kDa和20kDa的超濾膜對BBM酶解液超濾，收集20～30kDa分子量段的超濾液命名為BBM-2；

步驟S4，再將BBM-2組分經孔徑為150Da的納濾膜進行脫鹽處理，冷凍干燥即得；

優(yōu)選地，牛骨髓粉末的制備方法為：取新鮮的牛骨髓用冷水和溫水沖洗3～5次，剔除骨頭碎片和肉后存于-20℃使其硬化，加1:5比例液氮粉碎成粉末，-40℃?zhèn)溆谩?/p>

優(yōu)選地，堿性蛋白酶活力單位為2.4AU/g。

優(yōu)選地，步驟S1配成質量濃度為100g/L。

優(yōu)選地，步驟S2中每100g牛骨髓粉末對應添加堿性蛋白酶4.5g。

上述酶解多肽用于制備流感疫苗佐劑的用途。

10～20kDa酶解多肽：

一種酶解多肽，通過如下方法制備得到：

步驟S1，將牛骨髓粉末用超純水溶解；

步驟S2，加入堿性蛋白酶酶解，酶解條件為：pH值，8.5；酶解溫度，52℃；酶解時間，10小時；酶解完成后于沸水中水浴15min，12000r/min、4℃條件下離心15min，仔細收集上清即為BBM酶解液；

步驟S3，選取孔徑為20kDa和10kDa的超濾膜對BBM酶解液超濾，收集10～20kDa分子量段的超濾液命名為BBM-3；

步驟S4，再將BBM-3組分經孔徑為150Da的納濾膜進行脫鹽處理，冷凍干燥即得；

優(yōu)選地，牛骨髓粉末的制備方法為：取新鮮的牛骨髓用冷水和溫水沖洗3～5次，剔除骨頭碎片和肉后存于-20℃使其硬化，加1:5比例液氮粉碎成粉末，-40℃?zhèn)溆谩?/p>

優(yōu)選地，堿性蛋白酶活力單位為2.4AU/g。

優(yōu)選地，步驟S1配成質量濃度為100g/L。