[發明專利]一種重組微生物、其制備方法及其在生產輔酶Q10中的應用

在審

• 申請號: 201810984954.9
• 申請日: 2018-08-28
• 公開（公告）號: CN109055417A
• 公開（公告）日: 2018-12-21
• 發明（設計）人: 于洪巍;袁慎峰;朱永強;潘夢垚;于凱;陳志榮;李永;邱貴生;劉曉慶
• 申請（專利權）人: 浙江新和成股份有限公司;黑龍江新和成生物科技有限公司;上虞新和成生物化工有限公司;浙江大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N1/21;C07K14/195;C12P7/66;C12R1/19
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

1.一種生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述方法使用重組微生物，所述重組微生物含有編碼全局調控蛋白irrE的基因和滲透壓調控型啟動子proPB，所述編碼全局調控蛋白irrE的基因為SEQ ID NO：1所表示的核苷酸序列，所述滲透壓調控型啟動子proPB為SEQ IDNO：2所表示的核苷酸序列。

2.根據權利要求1所述的生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述重組微生物的制備包括如下步驟：

a.從含有編碼全局調控蛋白irrE的基因的親本菌株中克隆得到所述編碼全局調控蛋白irrE的基因；

b.將所述的編碼全局調控蛋白irrE的基因連接到載體上，構建含有所述編碼全局調控蛋白irrE的基因的重組載體，

其中，通過啟動子替換，將所述重組載體上的控制所述編碼全局調控蛋白irrE的基因表達的啟動子敲除后插入所述滲透壓調控型啟動子proPB，進一步調控所述編碼全局調控蛋白irrE的基因的表達；

c.將所述重組載體導入宿主細胞中從而得到所述重組微生物。

3.根據權利要求1或2所述的生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述滲透壓調控型啟動子proPB分離自細菌。

4.根據權利要求3所述的生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述細菌為埃希氏菌屬(Escherichia)。

5.根據權利要求3所述的生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述細菌為大腸桿菌(Escherichia coli)。

6.根據權利要求2所述的生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述步驟b的載體選自pBR322、pACYC177、pACYC184、RK2、pBBR1MCS-2、粘粒載體。

7.根據權利要求6所述的生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述步驟b的載體為pBBR1MCS-2。

8.根據權利要求2所述的生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述步驟a包括根據SEQ IDNO：1所示的DNA序列設計引物，以從所述親本菌株中提取的基因組DNA為模板，采用PCR法合成所述編碼全局調控蛋白irrE的基因。

9.根據權利要求2所述的生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述親本菌株為細菌。

10.根據權利要求9所述的生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述細菌為異常球菌屬(Deinococcus)。

11.根據權利要求10所述的生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述細菌選自由耐輻射異常球菌(Deinococcus radiodurans)、沙漠異常球菌(Deinococcus deserti)、戈壁異常球菌(Deinococcus gobiensis)、解蛋白異常球菌(Deinococcus proteolyticus)組成的組。

12.根據權利要求11所述的生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述細菌為耐輻射異常球菌(Deinococcus radiodurans)。

13.根據權利要求2所述的生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述步驟c的導入方式選自轉化、轉導、接合轉移或電穿孔，所述宿主細胞選自細菌或真菌。

14.根據權利要求13所述的生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述細菌為紅細菌屬的細菌。

15.根據權利要求14所述的生產輔酶Q10的方法，其特征在于，所述紅細菌屬的細菌為類球紅細菌。