[發(fā)明專利]一種用于檢測豬圓環(huán)病毒3型和豬偽狂犬病毒野毒株的引物組和試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810983438.4
• 申請日: 2018-08-27
• 公開（公告）號: CN108950085A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐引弟;焦文強(qiáng);王治方;吳勝軍;王克領(lǐng);張彬;張立憲;郎利敏;許峰
• 申請（專利權(quán)）人: 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州明華專利代理事務(wù)所(普通合伙) 41162
• 代理人: 王明朗

1.一種用于檢測豬圓環(huán)病毒3型與豬偽狂犬病毒野毒株的引物組，其特征在于，所述引物組由用于檢測豬圓環(huán)病毒3型的引物和用于檢測豬偽狂犬病毒野毒株的引物組成，其中，

所述用于檢測豬圓環(huán)病毒3型的引物的核苷酸序列為：

上游引物L(fēng)1：5ˊ- TAGTATTACCCGGCACCTCGGA -3ˊ（SEQ ID NO.1），

下游引物L(fēng)2：5ˊ- GAACCCTCAGAGGGTACCTGT -3ˊ（SEQ ID NO.2）；

所述用于檢測豬偽狂犬病毒野毒株的引物的核苷酸序列為：

上游引物L(fēng)3：5ˊ- ATGCGGCCCTTTCTGCTG -3ˊ（SEQ ID NO.3），

下游引物L(fēng)4：5ˊ- GCAGGACGCTCAGGTGCG -3ˊ（SEQ ID NO.4）。

2.權(quán)利要求1所述引物組在制備檢測豬圓環(huán)病毒3型和/或豬偽狂犬病毒野毒株試劑中的應(yīng)用。

3. 一種用于檢測豬圓環(huán)病毒3型與豬偽狂犬病毒野毒株的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的成分組成包括：DNA提取試劑、PCR擴(kuò)增試劑；其中，所述PCR擴(kuò)增試劑包括：PCR擴(kuò)增緩沖液、dNTP、上游引物L(fēng)1、下游引物L(fēng)2、上游引物L(fēng)3、下游引物L(fēng)4、Taq DNA聚合酶、無菌雙蒸水。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的成分組成還包括陽性對照和陰性對照，所述陽性對照為豬圓環(huán)病毒3型的基因組DNA和豬偽狂犬病毒野毒株的基因組DNA；所述陰性對照為無菌雙蒸水。

5.權(quán)利要求3或4所述的試劑盒在檢測豬圓環(huán)病毒3型和/或豬偽狂犬病毒野毒株中的應(yīng)用。

6.一種豬圓環(huán)病毒3型和豬偽狂犬病毒野毒株的多重PCR檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）引物合成：合成權(quán)利要求1所述的引物組；

（2）PCR擴(kuò)增：提取待測樣品的DNA，以提取的DNA為模板，采用步驟（1）合成的引物組進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)；

（3）分析PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的多重PCR檢測方法，其特征在于，步驟（2）中所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)的反應(yīng)體系為：10×PCR擴(kuò)增緩沖液5.0μl，2.5pmol/μL的dNTP 4.0μl，上游引物L(fēng)1、下游引物L(fēng)2、上游引物L(fēng)3、下游引物L(fēng)4各1.0μl， DNA 模板3.0μl，5U/μl 的Taq DNA聚合酶0.5μl，無菌雙蒸水補(bǔ)至50.0μl；其中，上游引物L(fēng)1、下游引物L(fēng)2、上游引物L(fēng)3和下游引物L(fēng)4的初始濃度均為25pmol/μL。

8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的多重PCR檢測方法，其特征在于，步驟（2）中所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性5min；94℃ 30s，56℃ 30s，72℃ 2min，共33個循環(huán)；72℃ 10min。