[發明專利]一種新城疫病毒/全懸浮CHOK1細胞株及其制法和采用該細胞株制備的抗原及疫苗

有效

• 申請號: 201810980429.X
• 申請日: 2018-08-27
• 公開（公告）號: CN110862956B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發明（設計）人: 侯野;李燕;王璐;韓丹;宋春雨;邵瑞華;劉少奇;李俊鋒;李鳳友
• 申請（專利權）人: 北京鼎持生物技術有限公司;遼寧鼎持生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N7/00;A61K39/17;A61P31/14
• 代理公司: 北京方安思達知識產權代理有限公司 11472
• 代理人: 陳琳琳;張紅生

本發明公開了一種新城疫病毒/全懸浮CHOK1細胞株及其制法和采用該細胞株制備的抗原及疫苗，所述細胞株為CHOK1?DC005細胞株，保藏號為CGMCC No.16211。本發明使得新城疫疫苗實現了由雞胚向哺乳動物細胞大規模培養生產的轉變，這不僅簡化了新城疫疫苗的生產工藝，降低生產成本，還大大提高疫苗的產量和質量。

技術領域

本發明涉及CHOK1細胞全懸浮培養技術在新城疫疫苗生產中的應用，屬于獸用生物制藥領域，具體地，本發明涉及一種新城疫病毒/全懸浮CHOK1細胞株及其制法和采用該細胞株制備的抗原及疫苗。

背景技術

目前，國內禽用疫苗的生產主要依靠傳統的“雞胚法”工藝實現。雖然這種技術也不斷進化來應對各種挑戰，包括產量、自動化、容量、質量保證和生產速度等方面。但在我國實際的生產過程中，由于SPF(無特異性病原)雞胚供應量的制約以及成本問題，許多的國產疫苗并非全部由SPF雞胚制造。尤其是禽用弱毒疫苗的制備，若所用雞胚來自普通雞蛋，可造成外源病原的污染，并由此造成了某些疫病的傳播和蔓延。與此同時，雞胚中的母源抗體還會干擾接種疫苗病毒的繁殖，直接影響疫苗的質量，常常會造成免疫失敗。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種新城疫病毒/全懸浮CHOK1細胞株。

本發明的另一目的在于，提供一種新城疫病毒/全懸浮CHOK1細胞株的制備方法。

本發明的再一目的在于，提供一種新城疫病毒抗原的制備方法以及采用所得到的抗原制備新城疫疫苗。

本發明利用懸浮培養的CHOK1細胞進行新城疫疫苗的生產，不僅縮短了疫苗生產周期，降低勞動強度和生產成本，還減少批間差異提高了疫苗質量，懸浮CHOK1細胞在新城疫疫苗上的應用，有望終結新城疫疫苗的雞胚時代。

為達到上述目的，本發明采用了如下的技術方案：

一種新城疫病毒/全懸浮CHOK1細胞株，所述細胞株為CHOK1-DC005細胞株，保藏號為CGMCC No.16211，為中國倉鼠卵巢細胞。

一種新城疫病毒/全懸浮CHOK1細胞株的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

將適合新城疫病毒侵染的CHOK1細胞通過全懸浮馴化與篩選最終獲得新城疫病毒/全懸浮CHOK1細胞株。

一種新城疫病毒抗原的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

1)復蘇上述新城疫病毒/全懸浮CHOK1細胞株，并采用懸浮細胞培養瓶逐級放大，將細胞擴增，待細胞生長至濃度為不低于6×10⁶cells/mL后，全部轉移至生物反應器中，培養并采樣進行細胞計數和活力檢測；

2)接毒和收毒

當生物反應器中活細胞密度不低于2.5×10⁶細胞/mL，按細胞培養液體積的1％-5％比例接入新城疫病毒，于接毒后24h起，每隔一時間段采樣進行細胞計數，當活細胞密度低于0.5×10⁶后，收獲病毒液即為新城疫病毒抗原，效價HA滴度達10-12log2/100μL。

優選地，所述新城疫病毒的病毒株為新城疫病毒Ⅰ系疫苗株、新城疫病毒Ⅱ系疫苗株、新城疫病毒Ⅲ系疫苗株、新城疫病毒Ⅳ系疫苗株、新城疫病毒克隆-30疫苗株或新城疫病毒基因Ⅶ型疫苗株。

一種新城疫疫苗，所述疫苗采上述制備的新城疫病毒抗原制備得到。

一種新城疫疫苗的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：

1)將收獲的新城疫病毒抗原用甲醛滅活；

2)向滅活后的新城疫病毒抗原加入水相混勻，與油相混合乳化分散均勻即得新城疫疫苗。