[發(fā)明專利]一種鑒別南瓜親緣關(guān)系遠(yuǎn)近的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810980212.9
• 申請日: 2018-08-27
• 公開（公告）號: CN109142497A
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何麗爛;任吉君;王惠珍;區(qū)炳慶
• 申請（專利權(quán)）人: 佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 王國標(biāo)

本發(fā)明提供了一種南瓜產(chǎn)地的檢測方法，該方法先構(gòu)建不同已知產(chǎn)地南瓜的酶電泳總圖譜，再以相同的方法建立待測產(chǎn)地南瓜的酶電泳圖譜，然后將酶電泳圖譜與酶電泳總圖譜進(jìn)行聚類分析，計算圖譜相異系數(shù)C，得到待測南瓜與已知南瓜的親緣關(guān)系遠(yuǎn)近，圖譜的遷移率Rf>0.2，相異系數(shù)C＝2w/(a+b)，w表示待測產(chǎn)地南瓜與已知產(chǎn)地南瓜中的一種兩相比較類型不同的酶帶數(shù)，(a+b)表示兩相比較各自類型的酶帶總數(shù)。本發(fā)明提供的鑒別南瓜親緣關(guān)系遠(yuǎn)近的方法，操作方便，圖譜直觀，能客觀準(zhǔn)確地反映待測南瓜與已知南瓜的親緣關(guān)系遠(yuǎn)近，不受南瓜形態(tài)、大小和生長時間的限制，可以使用南瓜的不同部位來完成鑒別。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于南瓜育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鑒別南瓜親緣關(guān)系遠(yuǎn)近的方法。

背景技術(shù)

南瓜(學(xué)名：Cucurbita moschata(Duch.ex Lam.)Duch.ex Poiret)葫蘆科南瓜屬的一個種，一年生蔓生草本植物，莖常節(jié)部生根，葉柄粗壯，葉片寬卵形或卵圓形，質(zhì)稍柔軟，葉脈隆起，卷須稍粗壯，雌雄同株，果梗粗壯，有棱和槽，因品種而異，外面常有數(shù)條縱溝，種子多數(shù)，長卵形或長圓形，具有良好的食療作用。南瓜原產(chǎn)墨西哥到中美洲一帶，世界各地普遍栽培，亞洲栽培面積最多，其次為歐洲和南美洲，中國普遍栽培。

南瓜栽培品種資源豐富，僅中國品種，就可分為蜜本南瓜、黃狼南瓜、大磨盤南瓜、小磨盤南瓜、牛腿南瓜、蛇南瓜、甘利王、紅栗王和砍瓜。現(xiàn)有技術(shù)中，大多采用植物形態(tài)學(xué)特征判斷南瓜親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近，通過植物形態(tài)學(xué)判斷南瓜親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近，準(zhǔn)確率低。

因此，為準(zhǔn)確鑒別南瓜親緣關(guān)系遠(yuǎn)近，尚需一種新的鑒別方法。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中，通過植物形態(tài)學(xué)特征難以準(zhǔn)確鑒別南瓜親緣關(guān)系遠(yuǎn)近的問題，本發(fā)明提供了一種鑒別南瓜親緣關(guān)系遠(yuǎn)近的方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種鑒別南瓜親緣關(guān)系遠(yuǎn)近的方法，包括以下步驟：

(1)構(gòu)建各已知產(chǎn)地南瓜的酶電泳總圖譜；

(2)以與步驟(1)相同的方法建立待測南瓜的酶電泳圖譜；

(3)將步驟(2)所述的酶電泳圖譜與步驟(1)所述的酶電泳總圖譜進(jìn)行聚類分析，計算圖譜相異系數(shù)C；

所述酶為多酚氧化酶；所述圖譜的遷移率Rf為0.3～0.8。

優(yōu)選地，步驟(1)所述構(gòu)建各已知產(chǎn)地南瓜的酶電泳總圖譜的方法包括：

(A)取南瓜組織1g，加入濃度為0.05mol/L的磷酸緩沖液3mL，于預(yù)冷研缽中勻漿后離心，取上清液，加入甘油后搖勻，得酶電泳液并低溫保存；

(B)采用凝膠電泳系統(tǒng)，對步驟(A)所述酶電泳液進(jìn)行電泳；

(C)根據(jù)步驟(B)的結(jié)果繪制模式圖并計算條帶數(shù)。

進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟(A)所述南瓜組織包括南瓜根、莖、葉、果實和種子中的一種。

進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟(A)所述磷酸緩沖液的pH為6.5～7.5。

進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟(A)所述甘油的添加量為15～25(wt)％。

進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟(A)所述低溫保存的溫度為-15～-25℃。

進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟(B)所述凝膠電泳系統(tǒng)為不連續(xù)丙烯酰胺凝膠電泳系統(tǒng)。

進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟(B)所述電泳為穩(wěn)流電泳，濃縮膠電流為1mA，分離膠電流為2mA。

進(jìn)一步優(yōu)選地，步驟(B)所述電泳的時間為4h，電泳的溫度為4～6℃。