[發明專利]一管式存儲至少兩種RCR試劑的方法

在審

• 申請號: 201810979726.2
• 申請日: 2018-08-27
• 公開（公告）號: CN109094945A
• 公開（公告）日: 2018-12-28
• 發明（設計）人: 高利飛;李靜靜;楊柳青;劉耀基;高歌;肖李亞;李進福;杜美;李振紅;付光宇;吳學煒;苗擁軍
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: B65D25/02
• 分類號: B65D25/02;B65D81/18;B65D85/50
• 代理公司: 鄭州異開專利事務所(普通合伙) 41114
• 代理人: 王霞

本發明公開了一種一管式存儲至少兩種RCR試劑的方法，是將不能同時存儲在一起的多種制劑采用相變材料進行分割包埋，使其同時密封封存在同一反應管內，其中體積較大的試劑包埋在反應管上部，體積較小的試劑包埋在反應管下部。本發明的優點在于方法簡單，將RCR反應的不同試劑通過相變材料進行分裝和隔離在一個反應管內，試劑被相變材料密閉包埋其中，不容易揮發，有效保證了試劑的穩定性；試劑無需在?18℃以下保存運輸，實現了試劑的冷藏保存運輸或15天內常溫保存運輸，大大降低了存儲和運輸的成本，便于床邊檢測技術的推廣應用；使用時加熱溶解相變材料，打開相變材料封隔層，上層試劑依靠重力沉降與下層試劑自動實現體系構建，非常便于實現POCT核酸檢測。

技術領域

本發明涉及基因檢測用試劑的存儲，尤其是涉及一種一管式存儲至少兩種RCR試劑的方法 。

背景技術

RT-PCR（reverse transcript PCR，逆轉錄PCR，或稱為反轉錄PCR），是聚合酶鏈式反應的一種應用的延伸。在RT-PCR過程中，一條RNA鏈被逆轉錄稱為互補DNA，再以此為模板通過PCR進行DNA擴增。常用的反轉錄酶有兩種，即鳥類成髓細胞性白細胞病毒（avianmyeloblastosis virus,AMV ）反轉錄酶和莫羅尼鼠類白血病病毒（moloney murineleukemia virus，MMLV）反轉錄酶。

RT-PCR通常有一步法RT-PCR和兩步法RT-PCR兩種方法。一步法RT-PCR操作簡便，RT和PCR之間無需開管，能夠減少污染的可能性，RT過程得到的cDNA產物全部用于PCR擴增，使得一步法的靈敏度更高。兩步法RT-PCR，是RT和PCR分別在最優條件下進行反應使得兩個反應充分發揮各自特點，但需要進行開蓋操作，操作過程中容易被污染，導致出現假陽性現象。

目前，市場上基因檢測主要在醫院的臨床分子診斷中心或者通過抽取血液樣本并外送到第三方醫學檢驗所進行檢測，整個過程包括抽血、保存樣本并寄送到專業的實驗室、在實驗室中進行細胞的裂解和核酸的提純、進行PCR擴增、并使用專業的設備進行檢測、出具報告。從取樣到生成報告，一般為24～168小時，整個過程速度慢、耗時長；由于樣本轉移的步驟多，因此容易造成污染，且需要籌建專業的實驗室和購買專業的設備，并配備專業的操作人員，這些因素都會增加整個醫院的運行成本，對基因檢測的廣泛應用造成了極大的阻礙。

POCT（即時檢驗），指在病人旁邊進行的臨床檢測，通常不一定是臨床檢驗師來進行。由于是在采樣現場即刻進行分析，省去了標本在實驗室檢驗時的復雜處理程序，是可以快速得到檢驗結果的一類新方法。近年來，由于當今高新技術的發展和醫學科學的進步，以及高效快節奏的工作方式，使得具有實驗室儀器小型化、操作簡單化、報告結果及時化的POCT方法越來越受到人們的青睞。

分子核酸檢測操作步驟復雜，容易被交叉污染，若想實現POCT檢測，需要求試劑檢測過程中全封閉，一旦啟動全自動檢測程序，就無需人工干預。這就要求在一個封閉卡盒里完成核酸提取和PCR擴增檢測的全部檢測過程，單人份分裝。

一步法RT-PCR使用的商品試劑盒一般包括2個試劑組分：酶和PCR反應液，因為兩個試劑組分在一起不能長期保存，所以兩組分是分裝在不同的容器內的。酶組分含有不耐熱的反轉錄酶，起反轉錄功能，試劑必須保存在-18℃以下冷凍保存運輸，而POCT單人份卡盒若需要-18℃保存運輸條件，由于成本較高，不便于實現床邊檢測技術的推廣應用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種一管式存儲至少兩種RCR試劑的方法，采用該方法可實現反應試劑冷藏或常溫條件下存儲，大大降低了檢測試劑盒的運輸存儲成本。

為實現上述目的，本發明可采取下述技術方案：

本發明所述的一管式存儲至少兩種RCR試劑的方法，是將不能同時存儲在一起的多種制劑采用相變材料進行分割包埋，使其同時密封封存在同一反應管內，其中體積較大的試劑包埋在反應管上部，體積較小的試劑包埋在反應管下部。