[發(fā)明專(zhuān)利]一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞運(yùn)輸保護(hù)液及其保護(hù)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810976006.0
• 申請(qǐng)日: 2018-08-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108990966A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-12-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高戎戎;佟艷輝
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海中溢精準(zhǔn)醫(yī)療科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A01N1/02
• 分類(lèi)號(hào): A01N1/02;C12N5/0775
• 代理公司: 上海容慧專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 31287
• 代理人: 于曉菁

1.一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞運(yùn)輸保護(hù)液，其特征在于，所述運(yùn)輸保護(hù)液含有以體積百分比計(jì)的以下組分：

其中，所述復(fù)方氨基酸原液的組分為每升原液含：精氨酸鹽酸鹽2.89g、組氨酸鹽酸鹽2.46g、亮氨酸3.795g、異亮氨酸1.70g、賴(lài)氨酸鹽酸鹽3.33g、苯丙氨酸2.83g、蘇氨酸1.97g、纈氨酸1.36g、蛋氨酸1.06g、色氨酸0.39g、甘氨酸3.24g、丙氨酸1.88g、脯氨酸1.00g、酪氨酸0.11g、絲氨酸0.67g、鹽酸半胱氨酸0.44g、門(mén)冬氨酸1.15g、谷氨酸1.97g、亞硫酸氫鈉0.50g、木糖醇50.0g。

2.如權(quán)利要求1所述的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞運(yùn)輸保護(hù)液，其特征在于，各原液均為注射級(jí)別的水溶液。

3.如權(quán)利要求1所述的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞運(yùn)輸保護(hù)液，其特征在于，所述運(yùn)輸保護(hù)液中臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的濃度為2×10⁵-8×10⁵個(gè)/mL。

4.一種臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞運(yùn)輸保護(hù)方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

①將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞懸液以700-900rpm的轉(zhuǎn)速離心4-6分鐘，吸棄上清液，加入一定量如權(quán)利要求1所述的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞運(yùn)輸保護(hù)液，反復(fù)吹打，制得活細(xì)胞濃度為2×10⁵-8×10⁵個(gè)/mL的細(xì)胞懸液；

②將調(diào)整后的含有臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞運(yùn)輸保護(hù)液進(jìn)行封裝保存并運(yùn)輸，運(yùn)輸中的保存溫度為2-8℃。

5.如權(quán)利要求4所述的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞運(yùn)輸保護(hù)方法，其特征在于，步驟①中，將活細(xì)胞濃度調(diào)整為2×10⁵-8×10⁵個(gè)/mL的具體方法為：吸取少量細(xì)胞懸液，用以進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞活力檢測(cè)，舍棄死細(xì)胞，計(jì)數(shù)活細(xì)胞，若活細(xì)胞濃度為2×10⁵-8×10⁵個(gè)/mL，則調(diào)整完成，否則再加入所述運(yùn)輸保護(hù)液進(jìn)行細(xì)胞數(shù)調(diào)整。

6.如權(quán)利要求4所述的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞運(yùn)輸保護(hù)方法，其特征在于，步驟①中所述細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞活力檢測(cè)是將細(xì)胞懸液和0.4％的臺(tái)盼蘭溶液按1:1混合，混勻1分鐘后，在顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞。

7.如權(quán)利要求4所述的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞運(yùn)輸保護(hù)方法，其特征在于，步驟①中離心轉(zhuǎn)速為800rpm，離心時(shí)間為5分鐘。

8.如權(quán)利要求4所述的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞運(yùn)輸保護(hù)方法，其特征在于，步驟②中的保存環(huán)境為避光，保存時(shí)間為不超過(guò)12小時(shí)。

9.如權(quán)利要求4所述的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞運(yùn)輸保護(hù)方法，其特征在于，還包括步驟：

1)從培養(yǎng)有第3-5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中吸棄原有培養(yǎng)基；

2)用磷酸緩沖液清洗培養(yǎng)的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞，并吸棄洗液；

3)加入胰酶-EDTA，37℃孵育2-3分鐘，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞，直至臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞完全消化下來(lái)，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化；

4)加入磷酸緩沖液，反復(fù)吹打，制得細(xì)胞懸液。