[發明專利]一種利用紅松催芽種子萌發芽體誘導不定芽的方法

有效

• 申請號: 201810975891.0
• 申請日: 2018-08-24
• 公開（公告）號: CN108925430B
• 公開（公告）日: 2020-01-14
• 發明（設計）人: 梁艷;高美玲;陳陽;李詩佳;趙艷;徐洪國;梁曉雪;孫悅;羅楓新;趙蕊陽;付雨晴
• 申請（專利權）人: 齊齊哈爾大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 23109 哈爾濱市松花江專利商標事務所
• 代理人: 賈澤純

1.一種利用紅松催芽種子萌發芽體誘導不定芽的方法，其特征在于按照如下步驟進行操作：

（1）外植體的取材與消毒處理：取前一年收獲的經混沙低溫窯藏催芽處理的成熟紅松種子，首先將紅松抽出的芽體從種殼中取出，去掉胚乳后，洗衣粉水洗滌，流水下沖洗干凈，去除種殼后采用質量百分含量為10%次氯酸鈉浸泡15min，無菌水沖洗5次，體積百分含量為70%酒精浸泡1mim，無菌水沖洗5次，再置于質量百分含量為0.1%的升汞溶液中消毒10min后，無菌水沖洗5次，即得到經過預處理的催芽紅松種子外植體；

（2）不定芽的誘導：將步驟（1）消毒處理獲得的外植體于超凈工作臺中切去胚根部位，按照形態學方向豎直放置于DCR培養基中進行不定芽的誘導培養；其中， DCR培養基中含2mg/L KT、0.5mg/L TDZ、500mg/L酸水解酪蛋白、500mg/L L-谷氨酰胺、質量百分含量為3%的蔗糖和質量百分含量為0.7%的瓊脂，DCR培養基pH值5.7~5.8；

誘導培養條件：溫度23±2℃、濕度60%~70%、光照時間14h/d、光照強度：2000-3000lux，培養時間為30d；

（3）不定芽的伸長生長：將步驟（2）誘導培養30d后獲得的不定芽轉接于DCR培養基中進行不定芽的伸長與增壯培養60d，并在培養至30d，更換一次新鮮的DCR培養基；

其中，DCR培養基含濃度為0.1mg/L的NAA、濃度為0.2~0.5mg/L的6-BA、濃度為500mg/L酸水解酪蛋白、500mg/L L-谷氨酰胺、1g/L活性炭，3%的蔗糖和0.7%的瓊脂，DCR培養基pH值5.7~5.8；誘導培養條件：溫度23±2℃、濕度60%~70%、光照時間14h/d、光照強度：2000-3000lux，培養時間為60d，其中30d更換一次新鮮的培養基；

（4）不定芽的生根誘導：將步驟（3）伸長與增壯培養的不定芽叢分離切割成單芽后置于1/2DCR培養基中進行生根馴化，即完成所述的；其中，1/2DCR培養基含0.5mg/L NAA、500mg/L酸水解酪蛋白、1g/L活性炭、 2%蔗糖和0.7%瓊脂，pH值5.7~5.8。

2.根據權利要求1所述的一種利用紅松催芽種子萌發芽體誘導不定芽的方法，其特征在于步驟（1）中紅松成熟種子為前一年10月采收經低溫沙藏催芽處理的成熟紅松種子。

3.根據權利要求1所述的一種利用紅松催芽種子萌發芽體誘導不定芽的方法，其特征在于步驟（1）中外植體的取材與消毒處理方法為：取前一年收獲的經低溫層級沙藏催芽處理的成熟紅松種子，以胚根部伸出外種皮0.5-1cm為外植體材料，首先將紅松抽出的芽體從種殼中取出，去掉胚乳后，洗衣粉水洗滌，流水下沖洗干凈，質量百分含量為10%次氯酸鈉浸泡20min，無菌水沖洗5次，體積百分含量為70%酒精1mim，無菌水沖洗5次，0.1%的升汞浸泡15min后，無菌水沖洗5次，即完成消毒處理。

4.根據權利要求1所述的一種利用紅松催芽種子萌發芽體誘導不定芽的方法，其特征在于步驟（3）中將步驟（2）誘導培養30d后獲得的不定芽置于DCR培養基中進行不定芽的伸長與增壯培養60d，并在培養至30d，更換一次新鮮的DCR培養基；步驟（3）中DCR培養基含0.1mg/L NAA、0.2mg/L 6-BA、1g/L活性炭、500mg/L酸水解酪蛋白、500mg/L L-谷氨酰胺、3%蔗糖和0.7%瓊脂。

5.根據權利要求1所述的一種利用紅松催芽種子萌發芽體誘導不定芽的方法，其中步驟(4)中生根馴化條件為：溫度23±2℃、濕度60%~70%、光照時間14h/d、光照強度2000-3000lux。

6.根據權利要求1所述的一種利用紅松催芽種子萌發芽體誘導不定芽的方法，其特征在于步驟四中不定芽叢的高度為2~3cm。