[發(fā)明專利]一種用于檢測抗MDA5抗體的ELISA試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810973433.3
• 申請日: 2018-08-24
• 公開（公告）號: CN109374899B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王楷文;趙江峰;王忠偉
• 申請（專利權(quán)）人: 上海飛晟生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58
• 代理公司: 上海天翔知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31224
• 代理人: 呂伴

本發(fā)明公開了一種用于檢測抗MDA5抗體的ELISA試劑盒。其特征在于，所述試劑盒內(nèi)含有純化后的優(yōu)勢抗原表位MDA5蛋白。本發(fā)明還公開了一種用于檢測抗MDA5抗體的ELISA試劑盒的檢測方法。本發(fā)明的有益效果在于：MDA5全長表達(dá)困難，技術(shù)要求高，購買成品化的MDA5全長蛋白價格更是昂貴。本申請在尋找MDA5優(yōu)勢抗原表位的基礎(chǔ)上，表達(dá)合成抗原，大大的縮減了成本。本發(fā)明的試劑盒，能用于抗MDA5抗體檢測，彌補了抗MDA5抗體檢測方法的空白，具有檢測通量大、結(jié)果確切、靈敏度高、操作簡便的特點，易于推廣和應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于抗體檢測領(lǐng)域，具體涉及一種用于檢測抗MDA5抗體的ELISA試劑盒及其檢測方法。

背景技術(shù)

皮肌炎(Dermatomyositis，DM)是臨床上較常見的危及生命的炎癥性肌病，主要累及皮膚、肌肉。目前認(rèn)為屬于自身免疫病范疇。皮肌炎年發(fā)病率在0.5-1/10萬人左右，且呈上升趨勢。在臨床實踐中我們觀察到累及皮膚或以皮膚為主要受累器官的DM患者，我們稱其為“無肌病性皮肌炎(Clinically Amyopathie Dermatomyositis，CADM)”的患者，預(yù)后極差。根據(jù)已有報道和我科臨床資料顯示，DM/CADM較PM預(yù)后差的原因是間質(zhì)性肺炎(Interstitial Lung Disease，ILD)的發(fā)生率極高，是DM/CADM患者死亡的首要原因。

抗MDA5(黑素瘤分化基因5)抗體不僅是DM/CADM合并ILD的特異性抗體，還是DM/CADM患者伴發(fā)急進型肺間質(zhì)病變的血清學(xué)標(biāo)記，該抗體水平與肺間質(zhì)病變的發(fā)生和病情嚴(yán)重程度高度正相關(guān)，且與皮膚潰瘍、血管炎的發(fā)生高度正相關(guān)。動態(tài)觀察血清中該抗體水平有助于預(yù)測病情演變、指導(dǎo)臨床治療。

目前國內(nèi)市場上還未出現(xiàn)市場化的抗MDA5抗體檢測試劑盒，因此，鑒于檢測抗MDA5抗體的重要性，開發(fā)一種可以廣泛應(yīng)用，高效靈敏的抗MDA5抗體檢測試劑盒以及相應(yīng)的檢測方法對于預(yù)測病情演變、指導(dǎo)臨床治療就顯得尤為緊要。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的之一在于提供了一種用于檢測抗MDA5抗體的ELISA試劑盒，所述試劑盒內(nèi)含有純化后的優(yōu)勢抗原表位MDA5蛋白。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述純化后的優(yōu)勢抗原表位MDA5蛋白氨基酸序列組為：

Asn-Ser-Asn-Met-Gly-Ser-Asp-Ser-Gly-Thr-Met-Gly-Ser-Asp-Ser-AspGlu-Glu-Asn-Val-Ala-Ala-Arg-Ala-Ser-Pro-Glu-Pro-Glu-Leu-Gln-LeuLeu-Leu-Asn-Leu-Glu-Asn-Gly-Glu-Asp-Ala-Gly-Val-Gln-Leu-Ser-AspPhe-Ser-Leu-Ile-Ile-Ile-Asp-Glu-Cys-His-His-Thr-Asn-Lys-Glu-AlaVal-Tyr-Asn-Asn-Ile-Met-Arg-His-Tyr-Leu-Met-Gln-Lys-Leu-Lys-AsnLeu-Gly-Leu-Thr-Ala-Ser

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述試劑盒內(nèi)設(shè)有抗MDA5抗體檢測板條，該檢測板條為包被優(yōu)勢抗原表位MDA5蛋白的96孔酶標(biāo)板。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述試劑盒內(nèi)還設(shè)有陰性對照血清、陽性對照血清、血清稀釋液、酶標(biāo)二抗、洗滌液、底物顯色液、終止液。

在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述的陰性對照血清為CADM患者免疫印跡法檢測抗MDA5抗體陰性血清，所述的陽性對照血清為CADM患者免疫印跡法檢測抗MDA5抗體陽性血清，所述的酶標(biāo)二抗為辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗人IgG。

本發(fā)明的目的之二在于提供一種用于檢測抗MDA5抗體的ELISA試劑盒的檢測方法，包括如下步驟：

(1)優(yōu)勢抗原表位MDA5蛋白包被96孔板，4度過夜；