[發(fā)明專利]一種瀕危物種富民枳離體再生體系的建立方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810972514.1
• 申請日: 2018-08-24
• 公開（公告）號: CN108925429A
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何承忠;鄒家通;羅一然;李旦;高雪松;張玉萍;何小帆;李錦宇
• 申請（專利權(quán)）人: 西南林業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京匯捷知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11531
• 代理人: 李宏偉

本發(fā)明提供一種瀕危物種富民枳離體再生體系的建立方法，屬于植株再生研究領(lǐng)域。通過選取富民枳當(dāng)年生嫩莖為外植體材料，經(jīng)過消毒處理后，接種于腋芽啟動培養(yǎng)中誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)生長，待腋芽萌生枝長至2?3cm時(shí)，切下后接種于增殖培養(yǎng)基中，得到增殖培養(yǎng)幼苗，將繼代增殖培養(yǎng)的高度在3?4cm無根幼苗單株切下，轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根培養(yǎng)15?20d，得到萌生不定根的完整組培苗。有效解決富民枳快速擴(kuò)繁的問題，能更好地開展瀕危物種富民枳的拯救，同時(shí)也為人工快速培育富民枳苗木進(jìn)行回歸種植，重建富民枳野外種群提供技術(shù)支撐，因此，對富民枳搶救性保護(hù)及野外種群重建具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植株再生研究領(lǐng)域，尤其涉及一種瀕危物種富民枳離體再生體系的建立方法。

背景技術(shù)

富民枳(Ponciruspolyandra)屬于蕓香科枳屬，為我國原產(chǎn)，是丁素琴等于1984年在云南省富民縣發(fā)現(xiàn)的一新種。其特征為常綠小喬木，成年樹體高約2.5m，新梢呈三棱形，綠色，老枝圓整，葉腋著一芽一短尖刺?；ㄆ?～4月，果成熟期為10～11月，較普通枳果實(shí)大，黃色，扁圓球形，果面粗糙，基部淺洼，有放射溝紋。蕓香科枳屬只有兩個(gè)種屬于中國特有種，即枳和富民枳。枳原產(chǎn)于中國中部；富民枳僅分布于云南省富民縣，是珍貴的柑橘育種種質(zhì)資源。

富民枳分布區(qū)域狹小，僅分布于云南省富民縣老青山周邊，海拔下限2100米，海拔上限2400米，生于峽谷陽坡，石巖山地灌叢中，屬于云南省特有的枳屬樹種，于1989年被列入《云南省第一批省級重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄》。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)資料記載，在上世紀(jì)八十年代，老青山東側(cè)東瓜嶺山谷中有大量的富民枳野生資源分布。但中國科學(xué)院昆明植物研究所于1992年開展富民枳野外資源調(diào)查時(shí)，在其原產(chǎn)地僅發(fā)現(xiàn)15株野生植株。隨著生態(tài)環(huán)境不斷惡化和修建道路等工程實(shí)施，富民枳野外資源急劇減少，于1999年列入《國家重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄(第一批)》。2012年，昆明市瀕危動植物收容拯救中心與富民縣林業(yè)局聯(lián)合開展富民枳野生資源調(diào)查，在其原產(chǎn)地僅發(fā)現(xiàn)1株野生植株。因此，除遷地保護(hù)的22株外，富民枳的野生資源已基本滅絕，開展其搶救性保護(hù)迫在眉睫。

在育苗繁殖技術(shù)方面，相關(guān)文獻(xiàn)僅見楊曼和張敏，“6～BA、NAA植物激素對富民枳組織培養(yǎng)的影響”以培養(yǎng)基誘導(dǎo)愈傷組織，切取莖尖和帶側(cè)芽的莖段，運(yùn)用不同濃度的6～BA和NAA對富民枳莖段進(jìn)行分化培養(yǎng)形成愈傷組織，(林業(yè)調(diào)查規(guī)劃[J],2007,32(6):149～151)。目前，富民枳的離體再生體系尚未建立，導(dǎo)致富民枳幼苗無法進(jìn)行快速擴(kuò)繁。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的問題，在此的目的在于提供一種能夠有效解決富民枳快速擴(kuò)繁的問題的瀕危物種富民枳離體再生體系的建立方法。該方法包括以下步驟：

步驟1：外植體選取與消毒：選取富民枳嫩芽并進(jìn)行沖洗后剪成含有葉腋的莖段，對莖段進(jìn)行消毒；

步驟2：腋芽啟動培養(yǎng)：將步驟1中的莖段斜插于腋芽啟動培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，得到萌生腋芽；

步驟3：增殖培養(yǎng)：將經(jīng)步驟2得到的腋芽插于增殖培養(yǎng)基上，腋芽基部形成大量叢生芽，將叢生芽進(jìn)行切割分離，接種于相同增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)，得到增殖培養(yǎng)幼苗；

步驟4：生根培養(yǎng)：將步驟3得到的增值培養(yǎng)幼苗切下，接種于生根培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，得到富民枳生根苗。

進(jìn)一步的，所述步驟1的具體步驟是：選取富民枳樹體春季萌生嫩莖，去除葉片；去除表面雜質(zhì)，加潔爾滅用凈水沖洗0.5h以上，剪成2～3cm長含1～2個(gè)葉腋的莖段，置于超凈工作臺采用75％乙醇浸泡10～12s進(jìn)行消毒，無菌蒸餾水沖洗2次，移入0.1％升汞浸泡處理10min，無菌水沖洗3～5次，用消毒濾紙吸干外植體表面殘留水分后進(jìn)行接種。