[發(fā)明專利]一種利用全細胞催化制備木糖醇的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201810972257.1 | 申請日： | 2018-08-24 |
| 公開（公告）號： | CN108949852B | 公開（公告）日： | 2021-08-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 應(yīng)漢杰;柳東;常子月 | 申請（專利權(quán)）人： | 南京工業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12P19/02 | 分類號： | C12P19/02;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 江蘇圣典律師事務(wù)所 32237 | 代理人： | 胡建華 |
| 地址： | 210000 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 細胞 催化 制備 木糖醇 方法 | ||
1.一種利用全細胞催化制備木糖醇的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)構(gòu)建重組大腸桿菌，其細胞內(nèi)同時表達木糖還原酶和葡萄糖脫氫酶；
所述重組大腸桿菌的構(gòu)建步驟如下：將木糖還原酶基因XR亞克隆到表達載體pETDuet-1的酶切位點NcoⅠ和SalⅠ之間得到pETDuet-XR，葡萄糖脫氫酶基因GDH亞克隆到pETDuet-XR的酶切位點BglⅡ和XhoⅠ之間，得到重組質(zhì)粒pETDuet-XR-GDH；將重組質(zhì)粒pETDuet-XR-GDH熱激轉(zhuǎn)化至E.coli BL21(DE3)中，得到重組大腸桿菌；
所述木糖還原酶由SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的基因序列所編碼；所述葡萄糖脫氫酶由SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的基因序列所編碼；
(2)含木糖和葡萄糖的溶液、步驟(1)得到的重組大腸桿菌和pH穩(wěn)定試劑形成生物催化體系，催化木糖發(fā)生還原反應(yīng)生成木糖醇；
步驟(2)中所述pH穩(wěn)定試劑為CaCO3，所述pH穩(wěn)定試劑在生物催化體系中的濃度為0.05-1g/mL。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中所述重組大腸桿菌在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)至OD為0.6-0.8時，添加IPTG誘導(dǎo)木糖還原酶和葡萄糖脫氫酶的表達，離心得到全細胞。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，誘導(dǎo)酶表達的條件如下：IPTG的終濃度為0.8-1.2mM，在20-30℃、150-250rpm下誘導(dǎo)表達8-16h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述含木糖和葡萄糖的溶液為秸稈水解液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述木糖在生物催化體系中的初始濃度為0.1-1.5M，所述葡萄糖在生物催化體系中的初始濃度為0.1-1.5M。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述重組大腸桿菌在生物催化體系中的初始濃度為0.05-0.3g/mL。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述催化反應(yīng)溫度為23-27℃，反應(yīng)時間為4-24h。
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