[發(fā)明專利]一種真菌檢測(cè)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201810971941.8
• 申請(qǐng)日: 2018-08-24
• 公開（公告）號(hào): CN109323996B
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王新君;趙美萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧波市奉化區(qū)人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31
• 代理公司: 北京華際知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11676
• 代理人: 鄧娜

本發(fā)明涉及一種顯色法真菌1,3?β?D?葡聚糖檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包括反應(yīng)主劑、主劑復(fù)溶液、樣本處理液、多肽顯色基質(zhì)、顯色液A、顯色液B、多肽顯色基質(zhì)溶解液、顯色液A溶解液以及顯色液B溶解液，所述顯色液A的原料選自1?萘酚?4?磺酸鈉、1?萘酚?2?磺酸鈉和1?萘酚?5?磺酸鈉中的一種或多種。本發(fā)明提供的試劑盒操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，檢測(cè)濃度范圍廣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種試劑盒，具體涉及一種檢測(cè)真菌1,3-β-D-葡聚糖的試劑盒。

背景技術(shù)

隨著抗生素、免疫抑制劑和皮質(zhì)類固醇激素在臨床的廣泛使用，臨床中發(fā)生深部真菌感染(invasive fungal infections，IFI)的機(jī)會(huì)也越來(lái)越多，而且深部真菌感染患者的死亡率近年來(lái)仍是居高不下，原因之一就是深部真菌感染的早期診斷困難，而傳統(tǒng)的診斷方法通常周期長(zhǎng)，敏感性差，且組織病理學(xué)檢查和深部組織培養(yǎng)對(duì)于危重患者并不適用。

內(nèi)毒素(endotoxin)是存在于革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁外膜中的脂多糖(LPS)。在臨床診斷中，血漿內(nèi)毒素水平的測(cè)定主要用于革蘭氏陰性細(xì)菌感染的診斷、治療效果的確定以及治療革蘭氏陰性細(xì)菌感染的預(yù)后、早期診斷等。已知內(nèi)毒素為有效的熱原，因此內(nèi)毒素的檢測(cè)在注射藥物中是極為重要的。在美國(guó)，日本和其它國(guó)家的藥典中已經(jīng)描述了內(nèi)毒素的測(cè)試方法。內(nèi)毒素被認(rèn)為是革蘭氏陰性細(xì)菌感染休克的主要原因。

β-葡聚糖存在于天然谷物中，細(xì)菌和真菌的細(xì)胞壁中包含一組β-D-葡聚糖多糖。根據(jù)來(lái)源不同，這些葡聚糖具有顯著不同的物理化學(xué)性質(zhì)。通常β-葡聚糖形成具有1-3個(gè)β-糖苷鍵的線性骨架，但其在分子量、溶解度、粘度、分支結(jié)構(gòu)和凝膠化性質(zhì)方面的變化會(huì)在動(dòng)物中引起多種生理作用。

β-葡聚糖廣泛存在于真菌細(xì)胞壁中，占其干燥重量的80％-90％。其中1-3-β-D葡聚糖占真菌壁成分50％以上，尤其在酵母樣真菌中其含量可更高，其形式以糖苷鍵連接的葡萄糖殘基骨架作為主鏈，分支狀1-6-β-D葡糖糖殘基作為側(cè)鏈。由于1-3-β-D葡聚糖廣泛存在于真菌的細(xì)胞壁中，當(dāng)真菌進(jìn)入人體血液或深部組織后，經(jīng)吞噬細(xì)胞的吞噬、消化等處理后，1-3-β-D葡聚糖可從胞壁中釋放出來(lái)，從而使血液及其他體液(如尿、腦脊液，腹水，胸水等)中1-3-β-D葡聚糖含量增高。當(dāng)真菌在體內(nèi)含量減少時(shí)，機(jī)體免疫可迅速清除1-3-β-D葡聚糖。因此，在臨床診斷中，血漿或血清中β-葡聚糖水平的測(cè)定被用于早期診斷真菌感染，并且確定治療效果和預(yù)后。

顯色法真菌1,3-β-D-葡聚糖檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)原理為：革蘭氏陰性細(xì)菌內(nèi)毒素能特異性地激活鱟血細(xì)胞中G因子，被激活的酶水解顯色基質(zhì)釋放出顯色基團(tuán)，顯色基團(tuán)與顯色液在高碘酸鈉存在下生成藍(lán)色縮和物，藍(lán)色縮合物在675nm波長(zhǎng)處的吸光度與內(nèi)毒素濃度在一定范圍內(nèi)成線性關(guān)系，所以通過(guò)檢測(cè)該波長(zhǎng)下經(jīng)處理后的檢測(cè)樣本的吸光度可確定該樣本中內(nèi)毒素的含量。

目前市面上銷售的真菌檢測(cè)試劑盒大多操作繁瑣，檢測(cè)步驟線路長(zhǎng)，引入干擾物的幾率大，導(dǎo)致檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，靈敏度較差，檢測(cè)濃度范圍較窄。因此，亟需一種操作簡(jiǎn)單，靈敏度好，可適應(yīng)各類檢測(cè)濃度的真菌檢測(cè)試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種顯色法真菌1,3-β-D-葡聚糖檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包括反應(yīng)主劑、主劑復(fù)溶液、樣本處理液、多肽顯色基質(zhì)、顯色液A、顯色液B、多肽顯色基質(zhì)溶解液、顯色液A溶解液以及顯色液B溶解液。

優(yōu)選的，所述反應(yīng)主劑以鱟血細(xì)胞為主要原料。

優(yōu)選的，所述主劑復(fù)溶液包括Tris-HCl和MgCl₂溶液。

優(yōu)選的，所述樣本處理液包括KOH和KCl的水溶液。

優(yōu)選的，所述多肽顯色基質(zhì)的原料為Boc-Thr-Gly-Arg-DEA(N,N’-二乙基苯胺)。