[發明專利]一種檢測馬鈴薯卷葉病毒的方法及其專用抗體

在審

• 申請號: 201810970970.2
• 申請日: 2018-08-24
• 公開（公告）號: CN109164261A
• 公開（公告）日: 2019-01-08
• 發明（設計）人: 張宗英;韓成貴;王穎;楊芳;李大偉;于嘉林;王輝
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種檢測馬鈴薯卷葉病毒的方法及其專用抗體。本發明首先制備了氨基酸序列如序列表中序列4或序列6所示的PLRV?MP蛋白，然后將PLRV?MP蛋白作為免疫原對動物加強免疫，獲得的多克隆抗體。采用Western blot，以該多克隆抗體為一抗檢測馬鈴薯卷葉病毒，不僅準確率高、靈敏度高，而且特異性好。本發明可檢測待測樣品是否含有馬鈴薯卷葉病毒，具有重大的應用價值。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種檢測馬鈴薯卷葉病毒的方法及其專用抗體。

背景技術

馬鈴薯卷葉病毒(Potato leafroll virus，PLRV)是馬鈴薯卷葉病毒屬(Polerovirus)的代表種，屬于黃癥病毒科(Luteoviridae)。由PLRV引起的馬鈴薯卷葉病在全世界的馬鈴薯種植區廣泛發生，是導致馬鈴薯嚴重減產的世界性病毒病害。PLRV不僅可以單一侵染，還常常伴有復合侵染，嚴重影響馬鈴薯的品質和產量。我國北方地區馬鈴薯產量損失一般為20％-50％，嚴重可達70％-80％；南方地區如貴州、四川、廣西玉林等地都有廣泛分布。

PLRV以介體蚜蟲持久非增殖型傳播，可侵染馬鈴薯、番茄等茄科植物的韌皮部和部分非韌皮部組織。侵染初期，植株上部葉片變黃且輕微卷曲，之后葉片卷曲且硬化，整株植株黃化、矮化、節間縮短，塊莖變小，有些塊莖切開呈網紋狀壞死。

PLRV為正義單鏈RNA(+ssRNA)病毒，病毒粒體球形，直徑大約20-30nm，由180個蛋白質亞基按T＝3排列形成。PLRV的基因組約5.9kb，編碼6個蛋白，其中一個為馬鈴薯卷葉病毒運動蛋白(簡稱PLRV-MP蛋白)，在PLRV復制過程中有調節作用。

發明內容

本發明的目的為檢測馬鈴薯卷葉病毒。

本發明首先保護一種檢測馬鈴薯卷葉病毒的方法，可包括步驟a2)：采用以PLRV-MP蛋白作為免疫原制備的抗體進行檢測。

上述方法中，所述PLRV-MP蛋白可為如下a1)或a2)或a3)或a4)：

a1)氨基酸序列是序列表中序列4所示的蛋白質；

a2)氨基酸序列是序列表中序列6所示的蛋白質；

a3)在序列表中序列4或序列6所示的蛋白質的N端或/和C端連接標簽得到的融合蛋白質；

a4)將a1)或a2)或a3)所示的蛋白質經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白質。

序列表中序列4可由156個氨基酸殘基組成。序列表中序列6可由164個氨基酸殘基組成。

為了使a1)或a2)中的蛋白質便于純化，可在序列表中序列4或序列表中序列6所示的蛋白質的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標簽。

表1.標簽的序列