[發明專利]抗人CD83單克隆抗體及其制備、鑒定和應用

有效

• 申請號: 201810970427.2
• 申請日: 2015-01-27
• 公開（公告）號: CN109320610B
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 肖衛華;郭雨剛;鄔婧;李銳;賈皓;邵長勝;陳微
• 申請（專利權）人: 中國科學技術大學先進技術研究院
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 合肥市長遠專利代理事務所(普通合伙) 34119
• 代理人: 程篤慶;黃樂瑜

本發明公開了抗人CD83單克隆抗體，其特異性針對人CD83胞外段第20至145位的氨基酸序列。本發明還公開了生產該單克隆抗體的雜交瘤細胞株。本發明還公開了該單克隆抗體的制備方法及鑒定方法。本發明還公開了該單克隆抗體的應用及其檢測試劑盒的開發，本發明的抗人CD83單克隆抗體可以用于免疫印跡、免疫沉淀、免疫組化、ELISA和流式細胞術等免疫學實驗，對包括人血清、人組織細胞、人組織標本、人體分泌物和人細胞培養物中CD83或sCD83的定量和定性檢測，也可用于表達CD83的人組織細胞的激活或抑制及用于拮抗和阻斷CD83的作用。

技術領域

本發明涉及單克隆抗體技術領域，尤其涉及抗人CD83單克隆抗體，具體地說，針對人CD83胞外段的第20至145位氨基酸序列有反應性的單克隆抗體。本發明還涉及產生該單克隆抗體的雜交瘤細胞株。本發明還涉及該單克隆抗體的制備方法及鑒定方法。本發明還涉及該單克隆抗體的應用及其試劑盒。

背景技術

CD83是一種分子量為45kDa的表面糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族。CD83存在兩種分子形式，膜結合的(membrane CD83，mCD83)和可溶性的(soluble CD83，sCD83)，兩者具有不同的生物學功能。sCD83僅包含mCD83的胞外區段，具有免疫抑制功能。大量體外實驗證實從細胞表面脫落或體外重組的sCD83對DC介導的T細胞增殖具有明顯的免疫抑制作用，動物體內實驗也發現重組sCD83蛋白對小鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)以及同種異型皮膚移植急性排斥反應具有很好的預防或治療作用。這些結果提示，重組sCD83很可能在器官移植手術中發揮重要的抗免疫排斥的作用。此外，在血液系統惡性腫瘤和風濕性關節炎患者中，發現了高水平的sCD83。然而，sCD83釋放背后的機制仍然未被闡明。

為了更加詳盡的研究mCD83和sCD83的功能，開發出準確快速檢測血液或組織局部mCD83和sCD83的蛋白表達的工具以及進一步開發以CD83為靶點的生物治療具有重要的臨床意義。

發明內容

本發明的一個目的是提供抗人CD83單克隆抗體，具體地說，針對人CD83胞外段的第20至145位氨基酸序列有反應性的單克隆抗體。

本發明的再一個目的是提供產生上述抗人CD83單克隆抗體的雜交瘤細胞株。

本發明的又一個目的是提供上述抗人CD83單克隆抗體的制備方法及鑒定方法。

本發明的又一個目的是提供上述抗人CD83單克隆抗體在免疫印跡、免疫沉淀、免疫組化、ELISA或流式細胞術的試驗中檢測CD83的應用。

為此，本發明利用畢赤酵母表達CD83胞外段重組蛋白免疫8-10周齡的BALB/c雌性小鼠后，取小鼠的脾臟細胞與骨髓瘤SP2/0細胞在聚乙二醇作用下進行體外融合，通過有限稀釋法和間接酶聯免疫吸附試驗(ELISA)篩選陽性雜交瘤細胞株。常規制備腹水，用MabSelect親和層析純化抗體。并且對抗人CD83單克隆抗體進行效價測定、親和常數的測定、Ig亞類的測定和特異性的鑒定。抗人CD83單克隆抗體的制備，為CD83分子的檢測以及CD83功能的研究提供了基礎，抗人CD83單克隆抗體可以廣泛用于分子免疫學的研究中。

本發明為了解決上述技術問題，提供以下各項：

本發明提供了抗人CD83單克隆抗體，其針對人CD83胞外段的第20至145位氨基酸序列有反應性。

具體地，抗人CD83單克隆抗體為IgG1,κ亞類。

具體地，抗人CD83單克隆抗體是由保藏號為CCTCC NO：C2014186的雜交瘤細胞株1H10分泌產生的單克隆抗體CD83-1H10。

具體地，抗人CD83單克隆抗體是由保藏號為CCTCC NO：C2014187的雜交瘤細胞株11A7分泌產生的單克隆抗體CD83-11A7。