[發明專利]用于檢測rs1801133的引物探針組及其應用

在審

• 申請號: 201810970181.9
• 申請日: 2018-08-24
• 公開（公告）號: CN108949966A
• 公開（公告）日: 2018-12-07
• 發明（設計）人: 李朋;劉婷婷;叢茜;趙海文
• 申請（專利權）人: 山東德諾生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
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本發明公開了一種用于檢測rs1801133的引物探針組及其應用。本發明首先保護一種引物探針組，由引物F、引物R和探針P組成；引物F為序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；引物R為序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；探針P為一個末端具有熒光基團且另一個末端具有熒光淬滅基團的單鏈DNA分子，且DNA分子中的部分核苷酸為鎖核酸，DNA分子的核苷酸序列為序列表的序列3所示。本發明可用于檢測rs1801133，判斷待測樣本基于該位點的基因型，從而指導臨床醫生對于潛在疾病的預防與干預，具有重大的應用推廣價值。

技術領域

本發明涉及一種用于檢測rs1801133的引物探針組及其應用。

背景技術

MTHFR為5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶，主要作用是在葉酸代謝通路中將5,10-亞甲基四氫葉酸轉化為具有生物學功能的5-甲基四氫葉酸。5-甲基四氫葉酸可以進一步進入甲基傳遞通路，通過同型半胱氨酸的重新甲基化過程間接為DNA甲基化和蛋白質甲基化提供甲基并且使血液中的同型半胱氨酸水平保持在一個較低的水平。此外葉酸的中間代謝產物在核苷酸合成過程中也有重要的作用，通過一碳單位代謝為嘌呤環的形成提供碳原子。MTHFR基因的缺陷將導致機體多個基礎生化過程的紊亂，包括細胞周期調控、DNA復制、DNA以及蛋白質甲基化修飾等，并進而引發神經管缺陷、癌癥、心腦血管疾病等多種病癥。MTHFR基因的缺陷對孕婦人群會引起神經管缺陷、先天性心臟病、唇腭裂、妊娠期高血壓疾病，引起自發性流產。

研究表明，MTHFR基因存在多種多態性的變化，多態性變化與亞甲基四氫葉酸還原酶的活性相關。其中677位核苷酸由C突變為T，使得該位點的胞嘧啶（C）被胸腺嘧啶（T）替代，對應于編碼后丙氨酸被纈氨酸替代，導致亞甲基四氫葉酸還原酶的活性降低50％～60％。

針對MTHFR基因位點進行基因分型檢測，可以有效預防該基因突變導致的多種病癥，具有重要的臨床意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于檢測rs1801133的引物探針組及其應用。

本發明首先保護一種引物探針組，由引物F、引物R和探針P組成；

引物F為如下（a1）或（a2）：

（a1）序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

（a2）將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；

引物R為如下（b1）或（b2）：

（b1）序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

（b2）將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子；

探針P為一個末端具有熒光基團且另一個末端具有熒光淬滅基團的單鏈DNA分子，且DNA分子中的部分核苷酸為鎖核酸，DNA分子的核苷酸序列為如下（c1）或（c2）：

（c1）序列表的序列3所示；

（c2）將序列3經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加。

探針P為5’末端具有HEX熒光基團且3’末端具有BHQ1熒光淬滅基團的單鏈DNA分子。

具體來說，所述探針P的核苷酸序列如序列表的序列3所示，且第1-3位核苷酸和第22-24位核苷酸均為鎖核酸。

所述引物探針組中，引物F、引物R、探針P的摩爾配比為：20：5：15。

本發明還保護所述引物探針組在制備用于檢測rs1801133的試劑盒中的應用。

本發明還保護一種用于檢測rs1801133的試劑盒，包括所述引物探針組。