[發明專利]一種篩選高效固氮溶磷菌的方法

有效

• 申請號: 201810967958.6
• 申請日: 2018-08-23
• 公開（公告）號: CN109136092B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 邵佳;孫慶業;黃國平;邱峰
• 申請（專利權）人: 安徽省交通航務工程有限公司;安徽大學
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02
• 代理公司: 北京凱特來知識產權代理有限公司 11260
• 代理人: 鄭立明;趙鎮勇

1.一種篩選高效固氮溶磷菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(a)首先將土壤與水混合后震蕩培養，離心后棄去上清液；

(b)按比例向沉淀中加入含外加碳源溶磷培養基,進行培養；

(c)將步驟(b)所得培養液離心后棄去上清液，按比例加入不含外加碳源固氮培養基，進行培養；

(d)將步驟(c)所得培養液離心后棄去上清液，按比例加入不含外加碳源溶磷培養基，進行培養；

(e)按照步驟(c)和(d)的方法交替進行培養多次；

(f)采用溶磷固氮培養基篩選出目標菌株；

所述步驟(a)中按照1：10的體積比將土壤與水混合，在30℃恒溫振蕩培養24h，離心后棄去上清液；所述步驟(b)中按照沉淀＝1：10的體積比向沉淀中加入含外加碳源溶磷培養基，在30℃恒溫培養24h；

所述步驟(c)中按照沉淀＝1：10的體積比向沉淀中加入不含外加碳源固氮培養基，在30℃恒溫培養24h；

所述步驟(d)中按照沉淀＝1：10的體積比向沉淀中加入不含外加碳源溶磷培養基，在30℃恒溫培養24h；

所述步驟(e)中按照步驟(c)和(d)的方法交替進行培養各5-7次；

所述含外加碳源溶磷培養基成分包括：10g/L葡萄糖，5g/L CaPO₄，0.1g/L(NH₄)₂SO₄，0.2g/L KCl，0.25g/L MgSO₄·7H₂O，5g/L MgCl₂·6H₂O，1mL/L微量元素一溶液，pH 7.0-7.5，121℃滅菌30min；

所述不含外加碳源溶磷培養基成分包括：5g/L CaPO₄，0.1g/L(NH₄)₂SO₄，0.2g/L KCl，0.25g/L MgSO₄·7H₂O，5g/L MgCl₂·6H₂O，1mL/L微量元素一溶液，pH 7.0-7.5，121℃滅菌30min；

所述不含外加碳源固氮培養基成分包括：1g/L K₂HPO₄，0.25g/L MgSO₄·7H₂O，0.1g/LCaCl₂·2H₂O，1mL/L微量元素二溶液，pH 7.0-7.5，121℃滅菌30min；

所述溶磷固氮培養基成分包括：10g/L葡萄糖，5g/L CaPO₄，0.25g/L MgSO₄·7H₂O，5g/LMgCl₂·6H₂O，0.2g/L CaSO₄·2H₂O，1mL/L微量元素二溶液，pH 7.0-7.5，121℃滅菌30min；

所述微量元素一溶液成分包括1g/L FeCl₃·6H₂O，0.1g/L H₃BO₃，0.02g/L CuSO₄·5H₂O，0.2g/L KI，0.1g/L MnCl₂·4H₂O，0.1g/LZnSO₄·7H₂O，0.1g/L CoCl₂·6H₂O，pH 7.0-7.5，121℃滅菌30min；

所述微量元素二溶液成分包括5g/L NaMoO₄·2H₂O，5g/L FeSO₄·7H₂O，0.1g/L H₃BO₃，0.02g/L CuSO₄·5H₂O，0.2g/L KI，0.1g/L MnCl₂·4H₂O，0.1g/LZnSO₄·7H₂O，0.1g/LCoCl₂·6H₂O，pH 7.0-7.5，121℃滅菌30min。