[發明專利]通過用微細分的二氧化硅處理去除絲氨酸蛋白酶

有效

• 申請號: 201810967589.0
• 申請日: 2011-05-26
• 公開（公告）號: CN109180776B
• 公開（公告）日: 2022-12-13
• 發明（設計）人: W·特施納;H·P·施瓦茨;R·馬德利納;S·斯瓦托斯;A·普列夫科維奇;A·韋伯
• 申請（專利權）人: 武田藥品工業株式會社
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C07K1/18;C07K1/30;C07K1/34;C07K1/36;C07K16/06;A61K9/00;A61K9/08;A61K35/16;A61K38/17;A61K47/18
• 代理公司: 上海華誠知識產權代理有限公司 31300
• 代理人: 湯國華

1.一種降低源自血漿的目標蛋白質組合物中的絲氨酸蛋白酶的量的方法，所述方法包括以下步驟：

(a) 執行第一目標蛋白質濃化步驟以形成第一濃化組合物；

(b) 在適合于結合至少一種絲氨酸蛋白酶的條件下使所述組合物與煙霧狀二氧化硅接觸；和

(c) 使所述煙霧狀二氧化硅與所述組合物分離以去除所結合的絲氨酸蛋白酶；

其中所述至少一種絲氨酸蛋白酶為因子XIa (FXIa)；

其中所述第一目標蛋白質濃化步驟是蛋白質沉淀步驟；

其中所述蛋白質沉淀步驟是醇分離步驟；

其中所述源自血漿的目標蛋白質是免疫球蛋白；和

其中適合于結合至少一種絲氨酸蛋白酶的條件包括介于4.5與6.0之間的pH和介于0.1mS/cm與3 mS/cm之間的電導率。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述方法進一步包括以下步驟：執行第二目標蛋白質濃化步驟，然后使所述濃化組合物與煙霧狀二氧化硅接觸。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述第二目標蛋白質濃化步驟是：

（i）蛋白質沉淀步驟；

（ii）超濾/透濾步驟；或

（iii）色譜濃化步驟。

4.根據權利要求3所述的方法，其中所述蛋白質沉淀步驟是醇分離步驟。

5.根據權利要求4所述的方法，其中所述方法進一步包括以下步驟：在使所述組合物與煙霧狀二氧化硅接觸之后，執行第三目標蛋白質濃化步驟。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述第三目標蛋白質濃化步驟是：

（i）蛋白質沉淀步驟；

（ii）超濾/透濾步驟；或

（iii）色譜濃化步驟。

7.根據權利要求6所述的方法，其中所述蛋白質沉淀步驟是醇分離步驟。

8.根據權利要求6所述的方法，其中所述色譜濃化步驟包括以下子步驟：

(i)在適合于結合所述源自血漿的目標蛋白質的條件下使所述源自血漿的目標蛋白質組合物與色譜樹脂接觸；和

(ii)自所述色譜樹脂洗脫所述源自血漿的目標蛋白質。

9.根據權利要求6所述的方法，其中所述色譜濃化步驟包括以下子步驟：

(i)在適合于結合至少一種雜質的條件下使所述第一濃化的源自血漿的目標蛋白質組合物與色譜樹脂接觸；和

(ii)使所述樹脂與所述源自血漿的蛋白質組合物分離，

其中在子步驟(i)中所述源自血漿的目標蛋白質不結合至所述色譜樹脂。

10.根據權利要求8所述的方法，其中所述色譜樹脂選自由以下組成的組：陰離子交換樹脂、陽離子交換樹脂、疏水性相互作用樹脂、混合式樹脂、羥磷灰石樹脂、配位體親和樹脂、免疫親和樹脂以及尺寸排阻樹脂。

11.根據權利要求9所述的方法，其中所述色譜樹脂選自由以下組成的組：陰離子交換樹脂、陽離子交換樹脂、疏水性相互作用樹脂、混合式樹脂、羥磷灰石樹脂、配位體親和樹脂、免疫親和樹脂以及尺寸排阻樹脂。

12.根據權利要求6所述的方法，其中所述色譜濃化步驟包括使用尺寸排阻色譜法按大小和/或形狀自所述目標蛋白質分離至少一種雜質。

13.根據權利要求1~12中任一項所述的方法，其中所述源自血漿的目標蛋白質組合物為制造中間物。

14.根據權利要求1~12中任一項所述的方法，其中所述組合物與煙霧狀二氧化硅在以下最終濃度下接觸：

（i）每克蛋白質至少1克的煙霧狀二氧化硅；

（ii）每克蛋白質至少2克的煙霧狀二氧化硅；或

（iii）每克蛋白質至少2.5克的煙霧狀二氧化硅。