[發明專利]用于檢測rs6065的引物探針組及其應用

在審

• 申請號: 201810967194.0
• 申請日: 2018-08-23
• 公開（公告）號: CN109371019A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 叢茜;劉婷婷;李朋;趙海文
• 申請（專利權）人: 山東德諾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6883;C12Q1/6858
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本發明公開了一種用于檢測rs6065的引物探針組及其應用。本發明首先保護一種引物探針組，由引物F、引物R和探針P組成；引物F為序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；引物R為序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；探針P為一個末端具有熒光基團且另一個末端具有熒光淬滅基團的單鏈DNA分子，且DNA分子中的部分核苷酸為鎖核酸，DNA分子的核苷酸序列為序列表的序列3所示。本發明可用于檢測rs6065，判斷待測樣本基于該位點的基因型，從而指導醫生對病人采取對應治療方案，具有重大的應用推廣價值。

技術領域

本發明涉及一種用于檢測rs6065的引物探針組及其應用。

背景技術

免疫性血小板減少癥（immune thrombocytopenia，ITP）是自身免疫紊亂產生抗血小板抗體，使得血小板破壞增多，加上巨核細胞成熟障礙血小板生成減少引起的疾病。治療以腎上腺皮質激素、丙種球蛋白和免疫抑制劑為主要方法。但臨床上不少發病年齡小（早于1歲），規則治療多年仍無緩解的難治性患兒，很可能與血小板功能缺陷，或與血小板互相反應的凝血因子功能缺陷有關。探討這些功能缺陷對難治性ITP有無影響是有意義的。

血小板抗體事實上就是膜糖蛋白抗體，目前認為主要是針對血小板膜糖蛋白（GP1BA）抗體，GP1BA的變異有可能使得機體易產生相應的抗體，也可能使得血小板激活增加，導致血小板型假性血友病。

血小板抗體的產生與病毒感染有關，機體抗病毒時（病毒致敏）產生了抗血小板膜糖蛋白（GP1BA）抗體進而導致血小板的破壞。給患兒使用激素、丙種球蛋白、免疫抑制劑治療后，血小板能夠維持在正常的狀態。但是對于難治性尤其是發病早的患兒，一般是基因變異導致暴露了抗原成分，使血小板成為正常抗體的靶細胞，導致免疫性的血小板破壞；GP1BA基因變異可能導致GP1BA部分結構直接成為免疫反應的抗原，誘導機體產生了針對GP1BA的特異性抗體物質，導致血小板的免疫性減少：GP1BA的基因變異導致的結構變化可能會導致血小板功能的異常而異常聚集。另外，GP1BA遺傳變異可能讓血小板在凝血過程中受血管性血友病因子協助黏附到內皮細胞的功能下降，不能及時止血。

血小板膜糖蛋白（GP）主要包括血小板膜糖蛋白Ⅰb-Ⅸ復合物（GPⅠb-Ⅸ）、血小板膜糖蛋白Ⅱb-Ⅲa復合物（GPⅡb-Ⅲa）等。血小板膜糖蛋白檢測的特異性和敏感性高，故對診斷巨大血小板綜合征和血小板無力癥具有診斷價值。

研究顯示，GP1BA基因557位SNP位點核苷酸由C突變為T，使得該位氨基酸由蘇氨酸突變為甲硫氨酸，從而改變了膜糖蛋白的性質，致使血小板被破壞。針對該SNP位點進行基因檢測，具有重大的臨床應用價值。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于檢測rs6065的引物探針組及其應用。

本發明首先保護一種引物探針組，由引物F、引物R和探針P組成；

引物F為如下（a1）或（a2）：

（a1）序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

（a2）將序列1經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列1具有相同功能的DNA分子；

引物R為如下（b1）或（b2）：

（b1）序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

（b2）將序列2經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子；

探針P為一個末端具有熒光基團且另一個末端具有熒光淬滅基團的單鏈DNA分子，且DNA分子中的部分核苷酸為鎖核酸，DNA分子的核苷酸序列為如下（c1）或（c2）：

（c1）序列表的序列3所示；

（c2）將序列3經過一個或幾個核苷酸的取代和/或缺失和/或添加。