[發(fā)明專利]具有高耐鹽性和油脂降解率的微生物菌劑及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201810966218.0
• 申請日: 2018-08-23
• 公開（公告）號: CN109022321B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 丁國春;李季;王博
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州微宏生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/18;C12N1/14;C05F11/08;C05F9/04;C12R1/125;C12R1/07;C12R1/25;C12R1/865;C12R1/11;C12R1/465;C12R1/69
• 代理公司: 蘇州謹(jǐn)和知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32295
• 代理人: 葉棟

1.一種具有高耐鹽性和油脂降解率的微生物菌劑，其特征在于，由枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、植物乳酸菌、釀酒酵母、巨大芽胞桿菌、白淺灰鏈霉菌以及米曲霉組成，所述微生物菌劑中各成分的濃度為：枯草芽孢桿菌，4.0×10⁹～1.0×10¹⁰cfu/mL；解淀粉芽孢桿菌，4.0×10⁹～1.0×10¹⁰cfu/mL；植物乳酸菌，1.0×10⁹～5.0×10⁹cfu/mL；釀酒酵母，5.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/mL；巨大芽胞桿菌，1.0×10⁹～5.0×10⁹cfu/mL；白淺灰鏈霉菌，5.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/mL；米曲霉，5.0×10⁸～1.0×10⁹cfu/mL。

2.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有高耐鹽性和油脂降解率的微生物菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、提供菌種原料和培養(yǎng)基，所述菌種原料由枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、植物乳酸菌、釀酒酵母、巨大芽胞桿菌、白淺灰鏈霉菌以及米曲霉組成；

S2、斜面培養(yǎng)：在無菌條件下，將所述菌種原料接種于固體培養(yǎng)基中，在25-35℃下培養(yǎng)1-3天；

S3、一級種子培養(yǎng)：在無菌條件下，將S2中培養(yǎng)好的菌種接種于液體培養(yǎng)基中，在25-35℃下培養(yǎng)1-3天，當(dāng)菌種液體培養(yǎng)OD600值為3.0-4.0時停止培養(yǎng)，得到一級種子液；

S4、二級種子培養(yǎng)：在無菌條件下，將所述一級種子液分別接種于裝有對應(yīng)液體培養(yǎng)基的錐形瓶中，在25-35℃下培養(yǎng)1-3天，當(dāng)菌種液體培養(yǎng)OD600值為3.0-4.0時停止培養(yǎng)，得到二級種子液；

S5、混合發(fā)酵培養(yǎng)：在無菌條件下，先將步驟S4中植物乳酸菌、釀酒酵母、巨大芽胞桿菌、白淺灰鏈霉菌、米曲霉的二級種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，再接種枯草芽孢桿菌的二級種子液進(jìn)行培養(yǎng)，最后接種解淀粉芽孢桿菌的二級種子液進(jìn)行培養(yǎng)，得到所述微生物菌劑。

3.如權(quán)利要求2所述的具有高耐鹽性和油脂降解率的微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述固體培養(yǎng)基包括牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基以及乳酸細(xì)菌固體培養(yǎng)基；所述液體培養(yǎng)基包括牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基以及乳酸細(xì)菌液體培養(yǎng)基；所述發(fā)酵培養(yǎng)基為：糖蜜3％、玉米漿粉8％、硫酸鎂0.2％、氫氧化鈉0.15％、磷酸氫二鉀0.1％、磷酸二氫鉀0.1％，余量為水。

4.如權(quán)利要求3所述的具有高耐鹽性和油脂降解率的微生物菌劑的制備方法，其特征在于，步驟S2中，具體包括以下步驟：

在無菌條件下，將所述枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌和巨大芽胞桿菌接種于所述牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，將所述植物乳酸菌接種于所述乳酸細(xì)菌固體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，將所述釀酒酵母、白淺灰鏈霉菌和米曲霉接種于所述馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；其中，將所述植物乳酸菌、釀酒酵母、巨大芽胞桿菌、白淺灰鏈霉菌、米曲霉于25～35℃條件下培養(yǎng)2-3天，將所述枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌于25～35℃條件下培養(yǎng)1-2天。

5.如權(quán)利要求3所述的具有高耐鹽性和油脂降解率的微生物菌劑的制備方法，其特征在于，步驟S3中，具體包括以下步驟：

在無菌條件下，將步驟S2中培養(yǎng)好的枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌和巨大芽胞桿菌接種于所述牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的植物乳酸菌接種于所述乳酸細(xì)菌液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，將培養(yǎng)好的釀酒酵母、白淺灰鏈霉菌和米曲霉接種于所述馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；其中，將植物乳酸菌、釀酒酵母、巨大芽胞桿菌、白淺灰鏈霉菌、米曲霉在25～35℃條件下，160r/min搖床培養(yǎng)2～3天，將枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌在25～35℃條件下，130r/min搖床培養(yǎng)1～2天，當(dāng)菌種液體培養(yǎng)OD600值為3.0-4.0時停止培養(yǎng)，制得所述一級種子液。